Thermo Fisher Scientific Primagam Non‑Human Primate M. tuberculosis Interferon‑Gamma Kit Bedienungsanleitung

Marke: Thermo Fisher Scientific

Modell: Primagam Non‑Human Primate M. tuberculosis Interferon‑Gamma Kit

Typ: Bedienungsanleitung

Primagam™ Non‑Human Primate M. tuberculosis

Interferon‑Gamma Kit

ELISA zum Nachweis von Tuberkulose bei nicht-humanen Primaten

Katalog-Nummer 63311

Pub.-Nr. MAN0018718 Version A.0

Technologie Arten Probentyp

ELISA Nicht-humane Primaten Vollblut

WARNUNG! Lesen Sie die Sicherheitsdatenbläer (SDB) und befolgen Sie die Anweisungen zur Handhabung. Tragen Sie eine

geeignete Schubrille sowie Schukleidung und -handschuhe. Sicherheitsdatenbläer (SDB) sind unter thermosher.com/support

verfügbar.

Produktbeschreibung

Applied Biosystems™ Primagam™ Non-Human Primate M. tuberculosis Interferon-Gamma Kit ist ein ELISA-basierter diagnostischer Test

für die Messung von Interferon-γ (IFN-γ) in Vollblutproben zum Nachweis von Tuberkulose (TB). Die Ausschüung von IFN-γ als eine

Reaktion auf eine Stimulierung mit PPD (Puried Protein Derivative)-Tuberkulin-Antigenen dient als Biomarker für eine TB-Infektion mit

hohem Vorhersagewert. Mit dem Testkit kann IFN-γ in folgenden Arten nachgewiesen werden: Aotus (Nachtaen), Ateles (Klammeraen),

Colobus (Mantelaen), Gibbons/Siamangs, Eigentliche Meerkaen/Brazzameerkaen, Languren, Lemuren, Makaken, Mandrillen,

Marmoseen, Totenkopfaen, Tamarine und Grüne Meerkaen.

Tuberkulose ist eine progressive Erkrankung der Atemwege von Primaten. Die Erkrankung kann von nicht-humanen Primaten an

Tierpeger in Zoos und Forschungslaboren übertragen werden, was eine Gefahr für die öentliche Gesundheit darstellt. Zum Testen von

nicht-humanen Primaten auf TB dient traditionell der Augenlid-Intrakutantest. Für diesen Test ist eine Immobilisation erforderlich, und

der TB-Nachweis erfolgt auf Grundlage einer Enündungsreaktion und eines Anschwellens an der Injektionsstelle. Das Primagam™

Non-Human Primate M. tuberculosis Interferon-Gamma Kit kann als zusälicher Test oder anstelle des Augenlid-Intrakutantests zum

Nachweis von TB dienen.

Das Testkit sieht ein zweitägiges Laborverfahren vor:

•Tag 1: Entnahme der Vollblutproben in Heparinröhrchen, dann Inkubation von Aliquoten jeder Probe mit einem einzelnen Antigen:

Bovine PPD, Avian PPD oder Nil Antigen Control.

•Tag 2: Von antigenstimulierten Lymphozyten produziertes IFN-γ wird miels ELISA-Technologie gemessen.

Das Testkit wurde im Rahmen eines Tuberkuloseausbruchs bei 54 Javaneraen (Macaca fascicularis) und 22 Rhesusaen (Macaca mulaa)

bewertet. Die Ergebnisse des Testkits haen eine Sensitivität von 92 % und eine Spezität von 100 %. Auch die zusäliche Bewertung einer

separaten Kolonie ohne TB in der Krankengeschichte (und daher mutmaßlich TB-frei) und normale Hauests ergaben eine Spezität von

100 %.

GEBRAUCHSINFORMATION

Nur für den tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich zur In-vitro-Verwendung.

Bestandteile und Lagerung

Reagenzien und Plaen für 30 Tests sind im Lieferumfang enthalten.

Hinweis: Anleitungen zur Rekonstitution und Verdünnung siehe “Bevor Sie beginnen“ auf Seite 3.

Tabelle 1 Primagam™ Non‑Human Primate M. tuberculosis Interferon‑Gamma Kit (Kat.-Nr. 63311)

Bestandteile Beschreibung Menge Lagerung [1]

Microplate Strip[2] Gebrauchsfertig. 2 × 96‑Well-Mikrotiterplat-

ten

2 bis 8 °C

Bovine PPD Vor Gebrauch verdünnen. 5 ml

Avian PPD Vor Gebrauch verdünnen. 5 ml

Nil Antigen Control

• Gebrauchsfertig.

• Enthält 0,01 % (w/v, Masse/Volu-

men) Thiomersal.

5 ml

Positive Primate IFN-γ Control • Vor Gebrauch rekonstituieren.

• Enthält 0,01 % (w/v) Thiomersal.

1 Fläschchen lyophilisierter

Feststoff

Negative Primate IFN-γ Control • Vor Gebrauch rekonstituieren.

• Enthält 0,01 % (w/v) Thiomersal.

1 Fläschchen lyophilisierter

Feststoff

Green Diluent (Proben- und Konjugatverdünnungspuffer) • Gebrauchsfertig.

• Enthält 0,01 % (w/v) Thiomersal. 40 ml

Conjugate‑100x Concentrate (mit Meerrettichperoxidase

markierten Antikörpern gegen Primaten-IFN‑γ)

• Vor Gebrauch rekonstituieren.

• Enthält 0,01 % (w/v) Thiomersal.

1 Fläschchen lyophilisierter

Feststoff

Wash Buffer‑20x Concentrate • Vor Gebrauch verdünnen.

• Enthält 0,01 % (w/v) Thiomersal. 2 × 50 ml

Enzyme Substrate Buffer • Gebrauchsfertig.

• Enthält H2O2.30 ml

Chromogen Solution‑100x Concentrate • Vor Gebrauch verdünnen.

• Enthält TMB in DMSO. 0,5 ml

Enzyme Stopping Solution • Gebrauchsfertig.

• Enthält 0,5 M H2SO4.15 ml

[1] Siehe Verfallsdatum auf Etikett.

[2] Die Wells sind mit Antikörpern gegen Primaten-IFN‑γ beschichtet.

Benötigtes, aber nicht mitgeliefertes Material

Sofern nichts Gegenteiliges angegeben wurde, können alle Materialien auf thermosher.com bezogen werden.

Artikel Quelle[1]

Geräte

Multiskan™ FC Microplate Photometer oder vergleichbarer ELISA-Mikrotiterplatten-Reader[2] 51119000

Wellwash™ Microplate Washer oder vergleichbares Produkt 5165000

(Optional)

Mikrotiterplatten-Schüttler MLS

(Optional)

Wippschüttler für Röhrchen MLS

Primagam

™

Non‑Human Primate M. tuberculosis Interferon‑Gamma Kit Gebrauchsinformation

Artikel Quelle[1]

Geräte

Mikrobiologische Sicherheitswerkbank (BSC Klasse II) MLS

Einkanal-Pipette (10 – 1000 µl) MLS

Mehrkanal-Pipette (50 – 500 µl) MLS

Labormischer (Vortexmischer oder vergleichbares Gerät) MLS

Nadelhalter, 2–3 pro Kollektor MLS

Befeuchteter Inkubator, eingestellt auf 37 °C MLS

Messzylinder (100 ml, 1 l und 2 l) MLS

Röhrchen, Platten und sonstige Verbrauchsmaterialien

Lithium-Heparin-Blutentnahmeröhrchen, 1 Röhrchen pro Tier MLS

23G bis 18G 1,5‑Zoll Vacutainer Nadeln, 1 Nadel pro Tier MLS

Sterile 1‑ oder 5‑ml-Messpipetten MLS

Gewebekulturplatte mit 24 Wells, 1 Platte pro 8 Tiere MLS

1 ml-Mikroröhrchen im 96 Well-Format mit Gestell und Schraubdeckeln, 1 Gestell pro 30 Tiere MLS

Polypropylenröhrchen MLS

Pipettenspitzen (gemäß Empfehlung des Pipettenherstellers) thermoﬁsher.com/pipettetips

Lösungsbehälter MLS

Reagenzien

Entionisiertes oder destilliertes Wasser (2 l) MLS

RPMI-Medium oder PBS (1X), pH 7.4 MLS

[1] MLS: Fisher Scientific (fisherscientific.com) oder anderer Hauptlieferant/Laborhändler.

[2] Der ELISA-Mikrotiterplatten-Reader muss in der Lage sein, eine Messung bei 450 nm mit einem Referenzfilter bei 620 - 650 nm durchzuführen.

Verfahrensrichtlinien

• Halten Sie die nationalen Sicherheitsvorschriften strikt ein.

• Führen Sie das Testkitprotokoll in Laboratorien durch, die für diesen Zweck geeignet sind.

• Betrachten Sie Proben als potenziell infektiös und alle Gegenstände, die in Kontakt mit den Proben kommen, als potenziell

kontaminiert.

• Der Umgang mit allen Blutproben von Primaten muss in einer mikrobiologischen Sicherheitswerkbank (BSC Klasse II) erfolgen.

• Alle Proben und Kontrollen müssen in Duplikaten getestet werden.

• Behälter und nicht verwendete Reagenzien müssen gemäß den vor Ort geltenden Anforderungen für biomedizinische Abfälle

entsorgt werden.

• Wechseln Sie nach jedem Pipeierschri die Pipeenspien.

• Jedes Reagenz muss in einem separaten Lösungsbehälter auewahrt werden.

• Verwenden Sie keine Testkit-Komponenten, die abgelaufen sind oder verändert aussehen.

• Verwenden Sie keine Testkit-Komponenten mit verschiedenen Testkit-Chargennummern.

• Verwenden Sie entionisiertes oder destilliertes Wasser oder Wasser vergleichbarer Qualität.

• Verwenden Sie bei allen Waschschrien einen Mikrotiterplaen-Wascher.

Bevor Sie beginnen

Ermitteln der höchsten Einstellung des Plattenschüttlers

Wird ein Plaenschüler verwendet, ermieln Sie die höchste Einstellung.

1. Stellen Sie sicher, dass die Plae sicher in Ihrem Schüler sit.

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2. Geben Sie 1,6 ml Wasser in jedes Well der Plae. Decken Sie anschließend die Plae mit Abdeckfolie ab.

3. Ermieln Sie die höchste Einstellung des Schülers, bei der Sie die Plae schüeln können, ohne dass Wasser auf die Abdeckfolie

sprit.

Verdünnen der Antigene

1. Geben Sie 160 µl Bovine PPD zu 840 µl RPMI-Medium oder PBS hinzu. Die Endkonzentration des Assays beträgt 300 IU/ml.

2. Geben Sie 160 µl Avian PPD zu 840 µl RPMI-Medium oder PBS hinzu. Die Endkonzentration des Assays beträgt 250 IU/ml.

Die verdünnten Antigene können bei 2 bis 8 °C bis zu 1 Monat lang gelagert werden.

Rekonstituieren der Kontrollen

1. Rekonstituieren Sie Positive Primate IFN-γ Control und Negative Primate IFN-γ Control in 1,0 ml entionisiertem oder destilliertem

Wasser.

2. Warten Sie mindestens 15 Minuten, bis sich der Inhalt aufgelöst hat.

3. Drehen Sie jedes Röhrchen 4- bis 5-mal über Kopf, um es zu mischen.

Rekonstituierte Kontrollen können bei 2 bis 8 °C bis zu 3 Monate gelagert werden.

Rekonstituieren von Conjugate‑100x Concentrate

WICHTIG! Halten Sie während der Handhabung des Conjugate-100x Concentrate stets eine Temperatur von 2 bis 8 °C ein, auch während

der Rekonstitution.

1. Rekonstituieren Sie Conjugate-100x Concentrate in 0,5 ml entionisiertem oder destilliertem Wasser.

2. Warten Sie mindestens 15 Minuten, bis sich der Inhalt aufgelöst hat.

3. Drehen Sie das Röhrchen vorsichtig 4- bis 5-mal über Kopf und bewahren Sie es bis zur Verwendung bei 2 bis 8 °C auf.

Rekonstituiertes Conjugate-100x Concentrate kann bei 2 bis 8 °C bis zu 3 Monate gelagert werden.

Vorbereiten des Wash Buffer‑1x

Hinweis: Für eine 96 Well-Mikrotiterplae wird 1 l Wash Buer-1x benötigt.

1. (Optional) Wenn im Wash Buer-20x Concentrate ein Niederschlag beobachtet wird, wärmen Sie die Flasche in einem Wasserbad bei

37 °C auf, bis sich der Niederschlag aufgelöst hat.

2. Mischen Sie Wash Buer-20x Concentrate gründlich.

3. Mischen Sie 1 Teil Wash Buer-20x Concentrate mit 19 Teilen entionisiertem oder destilliertem Wasser.

Geben Sie beispielsweise 50 ml Wash Buer-20x Concentrate zu 950 ml entionisiertem oder destilliertem Wasser.

4. Mischen Sie so lange, bis die Lösung klar ist.

Wash Buer-1x kann bei Raumtemperatur (22 ± 3 °C) bis zu 2 Wochen lang bzw. bei 2 bis 8 °C bis zu 1 Monat lang gelagert werden.

Tag 1: Entnehmen der Vollblutproben und anschließendes Inkubieren mit den Antigenen

Entnehmen der Vollblutproben

1. Entnehmen Sie bei jedem Tier mindestens 5 ml Blut in Heparinröhrchen. Überführen Sie die Proben bei Raumtemperatur ins Labor.

2. Die Blutproben müssen innerhalb von 12 Stunden nach der Entnahme kultiviert werden, damit die Lymphozyten noch lebensfähig

sind (nächster Abschni).

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Aliquotieren der Blutproben, dann Inkubation mit den Antigenen

1. Mischen Sie jede Blutprobe mit der von Ihnen bevorzugten Mischmethode, um sicherzustellen, dass sich das Heparin aufgelöst hat.

•Mit einem Wippschüler: Schüeln Sie die Röhrchen vorsichtig 1 bis 2 Minuten lang.

•Durch Überkopfdrehen: Drehen Sie jedes Röhrchen vorsichtig zehnmal über Kopf.

2. Überführen Sie drei 1,5-ml-Aliquote jeder Blutprobe in unterschiedliche Wells auf einer 24-Well-Gewebekulturplae (siehe Tabelle 2).

3. Geben Sie 100 µl Nil Antigen Control (N), verdünntes Bovine PPD (B) oder verdünntes Avian PPD (A) in die jeweiligen Wells mit

Blut. Richten Sie sich dabei nach der folgenden Tabelle.

Tabelle 2 Empfohlenes Layout für Probenplatte

123456

ATier 1

NTier 1

BTier 1

ATier 2

NTier 2

BTier 2

BTier 3

NTier 3

BTier 3

ATier 4

NTier 4

BTier 4

CTier 5

NTier 5

BTier 5

ATier 6

NTier 6

BTier 6

DTier 7

NTier 7

BTier 7

ATier 8

NTier 8

BTier 8

4. Durchmischen Sie die Proben mit den Antigenen 1 Minute lang gründlich mit einem Plaenschüler (siehe “Ermieln der höchsten

Einstellung des Plaenschülers“ auf Seite 3).

Steht kein Plaenschüler zur Verfügung, können Sie die Gewebekulturplae durch Schwenken vermischen. Halten Sie den Deckel

und die Plae dazu fest zusammen und schwenken Sie die Plae 10-mal im Uhrzeigersinn und danach 10-mal entgegen dem

Uhrzeigersinn.

WICHTIG! Eine optimale Assay-Leistung erhalten Sie nur, wenn die Proben gründlich mit den Antigenen durchmischt wurden.

Vermeiden sie die Ansäe zu stark zu mischen.

5. Seen Sie die Gewebekulturplae in einen befeuchteten, auf 37 °C eingestellten Inkubator. Inkubieren Sie die Plae 16 bis 20 Stunden

lang.

Tag 2: Ernten des Plasmas und anschließende Durchführung des ELISA

Bevor Sie beginnen

Bringen (Äquilibrieren) Sie alle Testkit-Komponenten (außer Conjugate-100x Concentrate) auf Raumtemperatur. Mischen Sie anschließend

die Reagenzien, Proben und Kontrollen vorsichtig.

Hinweis: Die Äquilibrierung einiger Reagenzien kann mehrere Stunden in Anspruch nehmen. Muss die Äquilibrierungszeit verkürzt

werden, wärmen Sie die Reagenzien in einem Wasserbad bei 30 °C auf.

Ernten des Plasmas und anschließendes Lagern der Proben (optional)

1. Entnehmen Sie die Gewebekulturplae aus dem Inkubator.

2. (Optional) Zentrifugieren Sie die Plae 5 Minuten lang bei 500 × g und Raumtemperatur.

3. Pipeieren Sie vorsichtig 150 bis 300 µl Plasma unter Meidung der Erythrozytenschicht am Boden. Überführen Sie das Plasma in ein

sauberes 1 ml-Mikroröhrchen in einem 96-Well-Lagerungsrack (siehe Tabelle 3).

Hinweis: Bei diesem Schri ist es wichtig, mit dem Plasma keine Erythrozyten zu ernten. Einige wenige Erythrozyten haben jedoch

keinen Einuss auf den Assay.

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Bei Verwendung des folgenden Layouts für die Lagerung können die Proben anschließend mit einer Mehrkanal-Pipee ezient zu

den Mikroplaenstreifen überführt werden.

Tabelle 3 Empfohlenes Layout für die Plasmalagerung

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A 1N[1] 1B 1A 2N 2B 2A 3N 3B 3A 4N 4B 4A

B 5N 5B 5A 6N 6B 6A 7N 7B 7A 8N 8B 8A

C 9N 9B 9A X X X 10N 10B 10A 11N 11B 11A

D 12N 12B 12A 13N 13B 13A 14N 14B 14A 15N 15B 15A

E 16N 16B 16A 17N 17B 17A 18N 18B 18A 19N 19B 19A

F 20N 20B 20A 21N 21B 21A 22N 22B 22A 23N 23B 23A

G 24N 24B 24A X X X 25N 25B 25A 26N 26B 26A

H 27N 27B 27A 28N 28B 28A 29N 29B 29A 30N 30B 30A

[1] Jedes Well ist mit der Nummer des Tieres gefolgt von dem Antigen gekennzeichnet (N–Nil Antigen Control, B–Bovine PPD, A–Avian PPD, X–leer).

Hinweis: Verwenden Sie nach Überführung der Proben in die Mikroplaenstreifen die leeren Wells (X) für die Kontrollen, die im

Lieferumfang des Testkits enthalten sind.

4. (Optional) Die Plasmaproben können in versiegelten Mikroröhrchen bei 2 bis 8 °C bis zu 28 Tage bzw. bei −20 °C bis zu 5 Jahre lang

gelagert werden.

Stellen Sie sicher, dass die Probenracks datiert und mit den Initialen des Labormitarbeiters, dem Röhrcheninhalt und den Tierdaten

gekennzeichnet sind.

Durchführen des ELISAs

• Bringen (Äquilibrieren) Sie alle Testkit-Komponenten (außer Conjugate-100x Concentrate) auf Raumtemperatur. Mischen Sie

anschließend die Reagenzien, Proben und Kontrollen vorsichtig.

•Ermieln Sie, wie viele 8-Well-Mikroplaenstreifen Sie für den Assay benötigen. Seen Sie die Streifen in die Mikroplaenrahmen.

Legen Sie jegliche nicht verwendeten Streifen und Rahmen wieder in den Beutel und bewahren Sie diese für eine zukünftige

Verwendung bei 2 °C bis 8 °C auf.

= Anti-IFN-γ-Antikörper |

= IFN-γ |

= Konjugat |

= Substrat

a. Geben Sie 50 µl Green Diluent in jedes Well der montierten Mikrotiterplae.

b. Überführen Sie 50 µl jeder Plasmaprobe in das jeweilige Well mit Green Diluent.

Die Plasmaproben eines individuellen Tieres müssen gleichzeitig in die Wells gegeben werden.

Wir empfehlen hierzu eine Multikanalpipee.

Hinweis: Plasmaproben können beim Auftauen gerinnen. Achten Sie beim Pipeieren sorgfältig

darauf, das korrekte Plasmavolumen in jedes Well zu geben.

c. Geben Sie 50 µl jeder Kontrolle in das jeweilige Well mit Green Diluent.

d. Schüeln Sie Plae mit einem Plaenschüler eine Minute lang bei mielhoher Geschwindigkeit,

um die Proben und Kontrollen mit Green Diluent zu mischen.

Steht kein Plaenschüler zur Verfügung, können Sie den Inhalt durch 5-maliges Auf- und

Abpipeieren mischen.

e. Decken Sie die Plae mit einem Deckel ab, und inkubieren Sie sie anschließend 60 Minuten lang

bei Raumtemperatur.

1Inkubieren der Proben mit

Green Diluent

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a. Waschen Sie die Wells der Mikrotiterplae sechsmal mit 400 µl Wash Buer-1x. Lassen Sie die

Wells zwischen den Waschgängen 10 Sekunden lang stehen.

Hinweis: Befüllen Sie die Wells vorsichtig mit Wash Buer-1x. Eine Kreuzkontamination mit

benachbarten Wells muss dabei sorgfältig vermieden werden.

b. Klopfen Sie die umgedrehte Plae auf einem Papiertuch aus, um den gesamten Wash Buer-1x

aus den Wells zu entfernen.

2Waschen der Wells

WICHTIG! Bereiten Sie Conjugate-1x frühestens 15 Minuten vor dem Gebrauch vor.

a. Mischen Sie für jeden 8 Well-Mikroplaenstreifen 10 µl Conjugate-100x Concentrate mit 1 ml

Green Diluent.

b. Mischen Sie das Conjugate-1x gründlich. Vermeiden Sie eine Schaumbildung, da diese zu einer

Denaturierung des Conjugates führen kann.

c. Lagern Sie nicht verwendetes Conjugate-100x Concentrate weiter bei 2 bis 8 °C.

3Verdünnen von

Conjugate‑100x

Concentrate

a. Geben Sie 100 µl Conjugate-1x in jedes Well der Mikrotiterplae.

b. Schüeln Sie die Plae eine Minute lang mit einem Plaenschüler bei mielhoher

Geschwindigkeit.

Steht kein Plaenschüler zur Verfügung, können Sie den Inhalt durch 5-maliges Auf- und

Abpipeieren mischen.

c. Decken Sie die Plae mit einem Deckel ab, und inkubieren Sie sie anschließend 60 Minuten lang

bei Raumtemperatur.

d. Aspirieren Sie die Lösung aus den Wells. Spülen Sie die Wells anschließend sechsmal mit Wash

Buer-1x (siehe “Waschen der Wells“ auf Seite 7).

4Zugeben von Conjugate‑1x

WICHTIG!

·Stellen Sie die Enzymsubstratlösung unmielbar vor Gebrauch her.

·Verwenden Sie sterile Kunststoehälter aus Polypropylen. Verwenden Sie keine Behälter oder

Pipeen aus Polystyrol.

a. Mischen Sie für jeden 8-Well-Mikroplaenstreifen 10 µl Chromogen Solution-100x Concentrate

mit 1 ml Enzyme Substrate Buer.

Beispiel: Mischen Sie für sechs Mikroplaenstreifen 60 µl Chromogen Solution-100x Concentrate

mit 6 ml Enzyme Substrate Buer.

b. Mischen Sie die Enzymsubstratlösung gründlich.

Hinweis: Verfärbt sich die Lösung blau, ist sie zu verwerfen.

5Herstellen der

Enzymsubstratlösung

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Hinweis: Die Inkubationszeit von 30 Minuten beginnt mit der Zugabe der Enzymsubstratlösung in das

erste Well.

a. Geben Sie 100 µl Enzymsubstratlösung in jedes Well der Mikrotiterplae.

b. Schüeln Sie die Plae eine Minute lang mit einem Plaenschüler bei mielhoher

Geschwindigkeit.

Steht kein Plaenschüler zur Verfügung, können Sie den Inhalt durch 5-maliges Auf- und

Abpipeieren mischen.

c. Decken Sie die Plae mit einem Deckel ab, und inkubieren Sie sie anschließend 30 Minuten lang

bei Raumtemperatur und im Dunklen.

6Zugeben der

Enzymsubstratlösung

a. Geben Sie 50 µl Enzyme Stopping Solution in jedes Well, und zwar in der gleichen Reihenfolge,

wie die Enzymsubstratlösung dispensiert wurde.

b. Klopfen Sie vorsichtig auf die Seite der Plae, um den Inhalt vorsichtig zu mischen.

Die Farbe der Lösung in den Wells wechselt von blau nach gelb.

c. Lesen Sie die Plae bei 450 nm (Referenzlter bei 620 bis 650 nm) innerhalb von 5 Minuten ab.

7Zugeben von Enzyme

Stopping Solution, dann

Ablesen der Platte

Analysieren der Ergebnisse

Berechnen der mittleren Extinktion

1. Berechnen Sie die mileren OD450-Werte aller Proben und Kontrollen.

2. Wird IFN-γ in einer Nil Antigen Control-stimulierten Probe nachgewiesen, ziehen Sie den mileren OD450-Wert von den Ergebnissen

für das betroene Tier ab.

Hinweis: Der Nachweis von IFN-γ in Nil Antigen Control-stimulierten Proben kann auf eine Koinfektion oder eine andere

Erkrankung hinweisen.

Validierungskriterien

Wenn die folgenden Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und die Proben müssen erneut getestet werden.

Reaktionstyp mittlere OD450 Variationskoefﬁzient (%)

Negative Primate IFN-γ Control < 0,150 30

Positive Primate IFN-γ Control > 1,00 15

Interpretation der Testergebnisse

Die Auswertung der Ergebnisse erfolgt gemäß der folgenden Tabelle:

Mittlere OD450 Interpretation

Bovine PPD − Avian PPD > 0,050 und

Bovine PPD − Nil Antigen Control > 0,050 Positiv

Avian PPD > Bovine PPD und

Avian PPD > Nil Antigen Control Negativ[1]

[1] Das Tier wird als reaktiv auf Geflügel-TB eingestuft.

• Im Falle von Extinktionswerten außerhalb der Grenzwerte des ELISA-Mikrotiterplaen-Readers siehe “Erneutes Testen von Proben

mit ungültigen Ergebnissen“ auf Seite 9.

• Dieser Test kann je nach Bedingungen vor Ort falsch-positive oder falsch-negative Ergebnisse liefern. Die Ergebnisse müssen im

Zusammenhang mit allen für das getestete Tier vorliegenden klinischen, anamnestischen und epidemiologischen Daten interpretiert

werden. Unter bestimmten Umständen können weitere Bestätigungstests erforderlich sein.

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• Für die Interpretation des Tests und die darauf beruhenden tierhalterischen Entscheidungen sind Anwender, jegliche beratende

Tierärzte, tiergesundheitliche Berater bzw. Behörden verantwortlich.

Erneutes Testen von Proben mit ungültigen Ergebnissen

1. Verdünnen Sie die Plasmaproben 1:4 in Green Diluent.

Geben Sie dazu beispielsweise 25 µl Testplasma zu 75 µl von Green Diluent.

2. Mischen Sie 3- bis 5-mal mit dem Vortexmischer bei mielhoher Geschwindigkeit, und wiederholen Sie anschließend das ELISA-

Verfahren.

Kundendienst und technischer Support

Aktuelles zu Kundendienst und technischem Support nden Sie unter thermosher.com/support, darunter:

• Telefonnummern von Ansprechpartnern weltweit

• Produkt-Support

– Produkt-FAQs

– Software, Patches und Updates

– Schulungen für zahlreiche Anwendungen und Instrumente

• Bestellung und Websupport

• Produktdokumentation

–Benuerhandbücher, Anleitungen und Protokolle

–Analysezertikate

–Sicherheitsdatenbläer (SDB) bzw. Material-Sicherheitsdatenbläer (MSDB)

Hinweis: Die Sicherheitsdatenbläer für Reagenzien und Chemikalien anderer Hersteller erhalten Sie vom jeweiligen Hersteller.

Eingeschränkte Produktgarantie

Life Technologies Corporation und/oder seine Tochtergesellschaft(en) gewährleisten ihre Produkte gemäß den allgemeinen Verkaufs- und

Lieferbedingungen von Life Technologies, die unter www.thermosher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions.html eingesehen

werden können. Bie wenden Sie sich bei Fragen unter www.thermosher.com/support an Life Technologies.

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Prionics Lelystad B.V. | Platinastraat 33 | 8211 AR Lelystad | The Netherlands

Beschreibungen der Symbole auf Produktetiketten oder in Produktdokumenten ﬁnden Sie unter thermoﬁsher.com/symbols-deﬁnition.

Inhaltliche Änderungen dieses Leitfadens behalten wir uns ohne Ankündigung vor.

HAFTUNGSAUSSCHLUSS: IN DEM GESETZLICH ZUGELASSENEN UMFANG HAFTET THERMO FISHER SCIENTIFIC INC. UND/ODER SEINE TOCHTERUNTERNEHMEN NICHT FÜR

BESONDERE, VERSEHENTLICHE, INDIREKTE, STRAFBARE, MEHRERE ODER FOLGESCHÄDEN IN VERBINDUNG MIT ODER HERVORGEHEND AUS DIESEM DOKUMENT,

EINSCHLIESSLICH IHRER NUTZUNG DIESES DOKUMENTS.

Übersetzung der englischen Publikation mit der Nummer MAN0018635 Version A.0.

Revisionshistorie: Pub. Nr. MAN0018635

Version Datum Beschreibung

A.0 25. November 2019

• Altes Dokument (Primagam_PI_V1.4e_140512.pdf) zu neuester Dokumentvorlage aktualisiert, mit zugehörigen Aktuali-

sierungen der Publikationsnummer, der Informationen über beschränkte Lizenzen, Gewährleistungen, Marken und Lo-

gos.

• Aktualisierung der Verfahren für die Antigenaufbereitung und Stimulierung der Blutproben.

Wichtige Lizenzinformationen: Für diese Produkte gelten unter Umständen eine oder mehrere Lizenzen zur eingeschränkten Nutzung („Limited Use Label License“). Mit der

Verwendung dieser Produkte erklären Sie sich mit den Bedingungen und Bestimmungen aller anwendbaren Lizenzen zur eingeschränkten Nutzung einverstanden.

angegeben.

thermoﬁsher.com/support | thermoﬁsher.com/askaquestion

thermoﬁsher.com

31 Dezember 2019