Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit Bedienungsanleitung

Marke
Thermo Fisher Scientific
Modell
PrioCHECK Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit
Typ
Bedienungsanleitung
Für tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich für in vitro zu verwenden.
GEBRAUCHSINFORMATION
PrioCHECK™ Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit
ELISA zum
in vitro
Nachweis von Antikörpern gegen
Toxoplasma gondii
in Serum, Plasma und Fleischsaft Proben von Schafen und Ziegen
Katalog-Nummer 7610240
Pub. Nr. MAN0013863 Version C.0
ACHTUNG! Bitte die Sicherheitsdatenblätter (SDB) lesen und Handlungsanweisungen befolgen. Es ist angemessene persönliche Schutzausrüstung (PSA)
zu tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe). Die Sicherheitsdatenblätter (SDB) sind abzurufen unter thermofisher.com/support.
ACHTUNG! POTENZIELLE BIOGEFAHR. Informieren Sie sich auf der jeweiligen Produktwebsite (unter thermofisher.com) über biologische Gefahren, die
von dem Produkt ausgehen können. Tragen Sie eine geeignete Schutzbrille sowie Schutzkleidung und -handschuhe.
Einleitung
Toxoplasma gondii ist ein einzelliger Parasit der Familie der Sarcocystidae. Infektionen mit T. gondii sind in Menschen und zahlreichen anderen warmblütigen Tieren
weit verbreitet. T. gondii kommt weltweit vor, die Prävalenz bei Menschen und Tieren schwankt stark zwischen verschiedenen Ländern. Weiter hängt die Prävalenz
in den Tieren ebenfalls von den jeweiligen Haltungsbedingungen ab. T. gondii vermehrt sich durch einen asexuellen Reproduktionszyklus in allen Spezies. Einen
sexueller Reproduktionszyklus hingegen durchläuft T. gondii nur im Endwirt, den Feliden (z.B. Katze). Toxoplasma Infektionen in Schafen und Ziegen können zu
Aborten, Todgeburten oder der Geburt lebensschwacher Lämmer führen. Alle diese Ereignisse können in einer Herde erfolgen, abhängig vom Stadium der
Trächtigkeit zum Infektionszeitpunkt des Muttertiers.
Fleischfresser und Allesfresser, Menschen mit eingeschlossen, können sich durch den Verzehr von rohem oder ungenügend gekochtem Fleisch, welches
Toxoplasma Bradyzoiten bzw. Tachyzoiten enthält, infizieren. Ebenfalls stellt die Einnahme von mit Oozysten verunreinigtem Wasser oder Lebensmitteln eine
Infektionsquelle dar. Die Katze spielt eine entschiedene Rolle in der Epidemiologie der Toxoplasmose. Jedoch kann die Prävalenz beim Menschen nicht alleine auf
die Katze zurückgeführt werden. Risikofaktorstudien haben belegt, dass nicht ausreichend gegartes Fleisch die Hauptinfektionsquelle für den Menschen darstellt.
Der Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit ist ein zuverlässiger und schneller diagnostischer Test zum Nachweis von
Antikörpern gegen Toxoplasma gondii in Serum, Plasma und Fleischsaft von Schafen und Ziegen und kann zur Kontrolle und Überwachung verwendet werden.
Testprinzip
Der diagnostische Test zum Nachweis von
Antikörpern, die gegen T. gondii in Serum,
Plasma und Fleischsaft von Schafen und
Ziegen gerichtet sind, basiert auf der ELISA
Technologie.
Die ELISA Platten sind mit aus Zellkultur
gewonnenem Tachyzoiten Antigen beschichtet,
Serum-, Plasmaproben und Fleischsaftproben
werden auf der Platte inkubiert. Ein mit
Peroxidase (POD) markierter Antikörper wird für
den Nachweis der an das Toxoplasma-Antigen
gebundenen Antikörper verwendet. Unter
Verwendung von TMB als Substrat zeigt eine
Farbentwicklung, optisch gemessen bei einer
Wellenlänge von 450 nm, das Vorhandensein von
Antikörpern gegen T. gondii an.
Der PrioCHECK™ Small Rum. Toxoplasma Ab
Strip Kit folgt einem Vierstufen-Protokoll, das
aus Probenvorbereitung, Inkubation der Probe,
Konjugatinkubation und Nachweis besteht.
Eine Platte mit 90 vorbereiteten Proben kann
innerhalb von 150 Minuten analysiert werden.
Komponenten des Testkits
Packung mit 5 Streifen-Platten für 450 Proben.
Das Kit soll bis zum Verfallsdatum bei 5±3°C
aufbewahrt werden. Siehe Kit-Etikett für
jeweiliges Verfallsdatum. Die Haltbarkeit
verdünnter, geöffneter oder rekonstituierter
Komponenten ist gegebenenfalls nachstehend
vermerkt.
Komponente
Beschreibung
1: Testplatte
Streifentestplatte. Fünf Testplatten, einzeln in vakuumierten
Beuteln, die ein Trockenmittel enthalten verpackt.
2: Probenverdünnungspuffer
Gebrauchsfertig. Zwei Flaschen mit je 60 ml
Probenverdünnungspuffer.
3: Waschpuffer (20x)
20x konzentriert, vor Gebrauch verdünnen. Zwei Flaschen
enthalten jeweils 60 ml Waschpuffer (20x).
4: Konjugat (30x)
30x konzentriert, vor Gebrauch verdünnen. Ein Fläschchen mit
2 ml Konjugat (30x). Die erforderliche Menge an Konjugat zum
Durchführen des Tests erst kurz vor der Verwendung verdünnen.
Siehe Anhang A.
5: Konjugatverdünnungspuffer
Gebrauchsfertig. Eine Flasche mit 60 ml Konjugatverdünnungspuffer.
6: Positivkontrolle
Ein Fläschchen mit 0,5 ml Positivkontrolle.
7: Schwachpositivkontrolle
Ein Fläschchen mit 0,5 ml Schwachpositivkontrolle.
8: Negativkontrolle
Ein Fläschchen mit 0,5 ml Negativkontrolle.
9: Chromogen (TMB) Substrat
Gebrauchsfertig. Eine Flasche mit 60 ml Chromogen (TMB) Substrat.
10: Stopplösung
Gebrauchsfertig. Eine Flasche enthält 60 ml Stopplösung.
Weitere Kitbestandteile
Gebrauchsinformation
Zusätzlich benötigte Materialien und Geräte
Schritt
Beschreibung(1)
Allgemein
Laborausrüstung gemäß den nationalen Sicherheitsvorschriften.
• Demineralisiertes Wasser oder Wasser gleicher Qualität
• Verdünnungsplatte für Probenverdünnung (z.B. klare farblose 96-Well Rundbodenplatten) oder
Vergleichbare; nicht bindend
• Einzelkanalpipette und Multikanalpipette die sich zum Pipettieren der benötigten Mengen eignen
• Pipettenspitzen (wie vom
Pipettenhersteller empfohlen)
• Behälter für die Lösungen
• Vortex
Probennahme
• Geeignete Sammelröhrchen für Blut
• Geeignete Sammelröhrchen für Fleischsaft
Analysener-
gebnisse
Plattenphotometer. Das Photometer muss einen geeigneten Filtersatz haben, um die Platten bei
450 nm ablesen zu können. (Referenzwellenlänge 620 nm).
Optional
• Plattenwascher.
• Plattenschüttler, z.B. Titramax 1000, Heidolph oder vergleichbares Gerät.
(1) Sofern nichts Gegenteiliges angegeben wurde, können alle Materialien auf thermofisher.com bezogen werden.
Ablauf des Tests
Vorsichtsmassnahmen
• Nationale Sicherheitsvorschriften müssen befolgt werden.
• Der PrioCHECK™ Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit muss in einem Labor durchgeführt werden, das für diesen
Zweck geeigneten ist.
• Probenmaterial sollte als potentiell infektiös betrachtet werden und alle Gegenstände, die damit in Berührung
gekommen sind, als möglicherweise kontaminiert.
Hinweise
Um optimale Ergebnisse mit dem PrioCHECK™ Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit zu erhalten, müssen
folgende Hinweise beachtet werden:
• Das Testverfahren muss streng eingehalten werden.
• Pipettenspitzen müssen nach jedem Pipettierschritt gewechselt werden.
• Für jede Lösung muss ein eigener Lösungsbehälter verwendet werden.
• Kitbestandteile dürfen nach ihrem Verfallsdatum, oder wenn Änderungen in ihrem Aussehen festgestellt werden,
nicht mehr verwendet werden.
• Kitbestandteile verschiedener Kit-Chargennummern dürfen nicht zusammen verwendet werden.
• Für den Test muss demineralisiertes Wasser oder Wasser vergleichbarer Qualität verwendet werden.
Vorbereitung der lösungen
Waschpuffer (20x)
Herstellung der Waschpuffergebrauchslösung durch Mischen von 1 Teil Waschpuffer (20x) (Komponente 3) mit
19 Teilen demineralisiertem Wasser oder Wasser vergleichbarer Qualität.
Bemerkung: Falls Präzipitate im Waschpuffer (20x) auftreten, die Flasche in einem 30°C Wasserbad erwärmen, bis sich
die Präzipitate vollständig gelöst haben.
15 min
2 PrioCHECK™ Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit Gebrauchsinformation
Konjugat (30x)
Herstellung der Konjugatgebrauchslösung durch Mi-schen von 1 Teil Konjugat (30x)
(Komponente 4) mit 29 Teilen Konjugatverdünnungspuffer (Komponente 5).
Probenvorbereitung
• Serum- und Plasmaproben können mit Standardmethoden gewonnen werden.
• Falls Fleischsaft getestet wird, wird zur Gewinnung des Fleischsaftes entweder
ein Stück Muskelgewebe, z.B 10 g (vorzugsweise Kaumuskel) in einem dafür
vorgesehenen Hilfsmittel gefroren und wieder aufgetaut, oder ein Stück Fleisch
wird ausgepresst, um Fleischsaft zu gewinnen.
Verdünnung der Serum- und Plasmaproben
Serum- und Plasmaproben werden wie folgt 1:100 verdünnt und Kontrollen
werden 1:10 wie folgt verdünnt:
1. Verwendung einer Verdünnungsplatte für den ersten Probenverdünnungsschritt.
2. 20 µl Positivkontrolle in die Vertiefungen A1 und B1 der Verdünnungsplatte
geben.
3. 20 µl Schwachpositivkontrolle in die Vertiefungen C1 und D1 der
Verdünnungsplatte geben.
4. 20 µl Negativkontrolle in die Vertiefungen E1 und F1 der Verdünnungsplatte
geben.
5. 10 µl Serum- oder Plasmaproben in die verbleibenden Vertiefungen der
Verdünnungsplatte geben.
6. 90 µl Probenverdünnungspuffer in jede Vertiefung der Verdünnungsplatte –
außer in diejenigen mit den Kontrollproben – geben.
7. 90 µl Probenverdünnungspuffer in jede Vertiefung der Testplatte geben.
8. 10 µl der verdünnten Proben und Kontrollen aus der Verdünnungsplatte in die
Testplatte überführen und durch 5-maliges Auf- und Abpipettieren vermischen
oder sanftem Einsatz eines Mikrotiterplattenschüttlers durchmischen.
Probenverdünnung für Fleischsaftproben
Fleischsaftproben und Kontrollen werden wie folgt 1:10 verdünnt:
1. Verwendung einer Verdünnungsplatte für den ersten Probenverdünnungsschritt.
2. Zugeben von 20 μl Positivkontrolle in die Wells A1 und B1 der
Verdünnungsplatte.
3. Zugeben von 20 μl Schwachpositivkontrolle in die Wells C1 und D1 der
Verdünnungsplatte.
4. Zugeben von 20 μl Negativkontrolle in die Wells E1 und F1 der
Verdünnungsplatte.
5. Zugeben von 20 μl Fleischsaftproben in die verbleibenden Wells der
Verdünnungsplatte.
6. Zugeben von 90 μl Probenpuffer zu jeder Testplatte.
7. 10 µl Fleischsaftproben und Kontrollen von der Verdünnungsplatte in die
Testplatte überführen und durch 5-maliges Auf- und Abpipettieren vermischen.
Alternativ kann die Testplatte für 1 Minute sachte auf einem Orbitalmischer
gemischt.
Anmerkung: Alternativ können die Kontrollen und Proben direkt in die
Testplatte gegeben werden. Hierzu werden 90 µl Probenpuffer in der Testplatte
vorgelegt und 10 µl Kontrollen und Fleischsaft in die entsprechenden
Vertiefungen der Testplatte zugegeben und gemischt.
Inkubation der probe
1. Die Proben auf der Testplatte für 60±1 Minuten bei Raumtemperatur (22±3°C)
inkubieren.
2. Die Testplatte viermal mit 300 µl pro Vertiefung Waschpuffergebrauchslösung
waschen (siehe Anhang A).
KonjugatInkubation
1. 100 µl verdünntes Konjugat zu jeder Vertiefung der Testplatte geben.
2. Die Testplatte für 60±1 Minuten bei Raumtemperatur (22±3°C) inkubieren.
3. Die Testplatte viermal mit 300 µl Waschpuffergebrauchslösung waschen (siehe
Anhang A).
4. Die Platte auf einem Papiertuch leicht ausklopfen, um jegliche restliche Flüssigkeit
aus den Vertiefungen zu entfernen.
Hinweis: Verbleibende Waschlösung kann die Substratreaktion in den
Nachweisschritten stören.
Nachweis
Substratreaktion
1. 100 µl Chromogen (TMB) Substrat in jede Vertiefung der Testplatte geben.
2. Testplatte für 15±1 Minuten bei Raumtemperatur (22±3°C) inkubieren.
3. 100 µl der Stopplösung in jede Vertiefung der Testplatte geben.
Anmerkung: Die Stopplösung in derselben Reihenfolge und im selben
Zeitabstand zugeben wie das Chromogen (TMB) Substrat.
Bemerkung: Die Farbe der Positivkontrolle verändert sich von blau nach gelb.
Ablesen des tests und berechnung der Ergebnisse
1. Testplatte entweder auf einem Horizontalschüttler (~300 upm) oder manuell auf
dem Arbeitstisch kurz rütteln (5−10 s).
2. Die optische Dichte (OD) jeder Vertiefung der Testplatte bei 450 nm innerhalb von
15 Minuten nach Abstoppen der Farbreaktion ablesen.
(Empfehlung: Verwendung eines Referenzfiltersets bei 620 nm.)
3. Den mittleren OD450-Wert der Vertiefung A1 und B1 (Positivkontrolle = OD450 PK)
ermitteln.
4. Den mittleren OD450-Wert der Vertiefung E1 und F1 (Negativkontrolle = OD450 NK)
ermitteln.
5. Die % Positivität (PP) der Kontrolle und der Serumproben gemäß unten
angegeben Formel berechnen.
Die korrigierten OD450 Werte aller Proben werden als % Positivität (PP) in
Bezug zum korrigierten OD450 max. angegeben.
OD450 Probe - OD450 NK
OD450 PK - OD450 NK ×100 = X% Positivität
Auswertung der Ergebnisse
Kriterien zur Validierung
1. Die mittlere OD450 der Positivkontrolle muss ≥1,2 sein.
2. Die mittlere % Positivität (PP) der Schwachpositivkontrollen muss ≥35% sein.
3. Die mittlere OD450 der Negativkontrollen muss <0,15 sein.
Werden diese Kriterien nicht erfüllt, sind die Ergebnisse ungültig und die
Proben müssen nochmals getestet werden.
Auswertung der Ergebnisse
• Ergebnisse, die oberhalb oder gleich 20 PP sind, werden als positiv gewertet.
• Ergebnisse, die unterhalb des Grenzwertes von 20 PP liegen, sind negativ.
Anhang A – Herstellung der Gebrauchslösungen
Gebrauchslösung des Waschpuffers
Angegebenes Volumen von demineralisiertem Wasser und Waschpuffer (20x;
Komponente 3) vermischen. Für 1 Liter Waschpuffergebrauchslösung:
• 50 ml Waschpuffer (20x) in eine 1 l Flasche überführen.
• 950 ml demineralisiertes Wasser zugeben und vermischen bis man eine klare
Lösung erhält (etwa 30 Minuten).
Andere Mengen Waschpuffergebrauchslösung bitte untenstehender Tabelle
entnehmen.
ml Waschpuffer-
gebrauchslösung
= ml Waschpuffer (20x) +
ml demineralisiertem
Wasser
0,3 l
=
15 ml
+
285 ml
0,5 l
=
25 ml
+
475 ml
1,0 l
=
50 ml
+
950 ml
2,0 l
=
100 ml
+
1900 ml
Stabilität der Gebrauchslösung des Waschpuffers: 2 Wochen bei 22±3°C.
Gebrauchslösung des Konjugats
Angegebene Volumen von Konjugat 30x (Komponente 4) mit angegebener
Menge an Konjugatpuffer (Komponente 5) mischen, um gewünschte Menge an
Konjugatgebrauchslösung zu erhalten.
Anzahl
Platten
ml benötigtes
Konjugat
=
ml Konjugat
(30x)
+ ml Konjugatpuffer
1
12 ml
=
0,4 ml
+
11,6 ml
2
24 ml
=
0,8 ml
+
23,2 ml
3
36 ml
=
1,2 ml
+
34,8 ml
4
48 ml
=
1,6 ml
+
46,4 ml
5
60 ml
=
2,0 ml
+
58,0 ml
Anhang B – Pipettierschema
Empfohlenes Pipettierschema für Verdünnungsplatte und Testplatte
12345678910 11 12
A
Positiv
Kontrolle
Probe
3
Probe
11
Probe
19
Probe
27
Probe
35
Probe
43
Probe
51
Probe
59
Probe
67
Probe
75
Probe
83
B
Positiv
Kontrolle
Probe
4
Probe
12
Probe
20
Probe
28
Probe
36
Probe
44
Probe
52
Probe
60
Probe
68
Probe
76
Probe
84
C
Schwach
Positiv
Kontrolle
Probe
5
Probe
13
Probe
21
Probe
29
Probe
37
Probe
45
Probe
53
Probe
61
Probe
69
Probe
77
Probe
85
D
Schwach
Positiv
Kontrolle
Probe
6
Probe
14
Probe
22
Probe
30
Probe
38
Probe
46
Probe
54
Probe
62
Probe
70
Probe
78
Probe
86
E
Negativ
Kontrolle
Probe
7
Probe
15
Probe
23
Probe
31
Probe
39
Probe
47
Probe
55
Probe
63
Probe
71
Probe
79
Probe
87
F
Negativ
Kontrolle
Probe
8
Probe
16
Probe
24
Probe
32
Probe
40
Probe
48
Probe
56
Probe
64
Probe
72
Probe
80
Probe
88
G
Probe
1
Probe
9
Probe
17
Probe
25
Probe
33
Probe
41
Probe
49
Probe
57
Probe
65
Probe
73
Probe
81
Probe
89
H
Probe
2
Probe
10
Probe
18
Probe
26
Probe
34
Probe
42
Probe
50
Probe
58
Probe
66
Probe
74
Probe
82
Probe
90
thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion
thermofisher.com
6. Juli 2021
Kundendienst und technischer Support
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erhalten.
Aktuelles zum Kundendienst und technischen Support finden Sie unter
thermofisher.com/support.
HINWEIS: Wenden Sie sich für Sicherheitsdatenblätter für Reagenzien und
Chemikalien anderer Hersteller an den jeweiligen Hersteller.
Beschränkte Gewährleistung
Die Life Technologies Corporation bzw. ihre verbundenen Unternehmen räumt
dem Käufer für ihre Produkte Gewährleistungsrechte wie in den Allgemeinen
Verkaufsbedingungen von Life Technologies beschrieben ein, die auf der
Website von Life Technologies unter thermofisher.com/us/en/home/global/
terms-and-conditions eingesehen werden können. Sollten Sie Fragen haben,
kontaktieren Sie bitte Life Technologies unter thermofisher.com/support.
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EKTE, STRAFBARE, MEHRERE ODER FOLGESCHÄDEN IN VERBINDUNG MIT ODER HERVORGEHEND
AUS DIESEM DOKUMENT, EINSCHLIESSLICH IHRER NUTZUNG DIESES DOKUMENTS.
Versionsgeschichte: Pub. Nr. MAN0013863 (Deutsch)
Ver.
Datum
Beschreibung
C.0
6. Juli 2021
Die deutschen Gesetzesangabe zur Zulassung wurde entfernt.
B.0 18 März 2020
• Die Gesetzesangabe zur Zulassung wurde aktualisiert.
• Die Beschreibung für Revision A.0 in dieser Tabelle wurde korrigiert.
A.0 18 März 2019
• Neues Dokument. Altes Dokument (PrioCHECK
Toxoplasma_Ab_SR__PI_v1.5_d.doc) zu neuester Dokumentvorlage
aktualisiert, mit zugehörigen Aktualisierungen zu Informationen über
beschränkte Lizenzen, Gewährleistungen, Marken und Logos.
• Der Produktname wurde von PrioCHECK® Toxoplasma Ab SR in
PrioCHECK
™
Small Rum. Toxoplasma Ab Strip Kit geändert.
Wichtige Lizenzinformationen: Für dieses Produkt gelten unter Umständen eine oder mehrere
Lizenzen zur eingeschränkten Nutzung („Limited Use Label License“). Mit der Verwendung dieses
Produkts erklären Sie sich mit den Bedingungen und Bestimmungen aller anwendbaren Lizenzen
zur eingeschränkten Nutzung einverstanden.
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