Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit Bedienungsanleitung

Marke: Thermo Fisher Scientific

Modell: PrioCHECK Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit

Typ: Bedienungsanleitung

Für tierärztlichen Gebrauch. Ausschließlich für in vitro zu verwenden.

GEBRAUCHSINFORMATION

PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit

ELISA für

in vitro

Nachweis von Antikörpern gegen das klassische Schweinepestvirus im Serum und Plasma von Schweinen

Katalog-Nummer 7610600

Pub. Nr. MAN0013894 Version B.0

Die deutsche Gebrauchsinformation ist nach §11 Absatz 2 TierGesG zugelassen

Für Deutschland: Zul.Nr: BFAV-B 301

ACHTUNG! Bitte die Sicherheitsdatenblätter (SDB) lesen und Handlungsanweisungen befolgen. Es ist angemessene persönliche

Schutzausrüstung (PSA) zu tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe). Die Sicherheitsdatenblätter (SDB) sind abzurufen unter

thermofisher.com/support.

ACHTUNG! POTENZIELLE BIOGEFAHR. Informieren Sie sich auf der jeweiligen Produktwebsite (unter thermofisher.com) über biologische

Gefahren, die von dem Produkt ausgehen können. Tragen Sie eine geeignete Schutzbrille sowie Schutzkleidung und -handschuhe.

Einführung

Der Erreger der klassischen Schweinepest (CSF) gehört zum Genus Pestivirus aus der Familie der Flaviviridae. CSF ist eine ansteckende virale

Erkrankung bei Schweinen. Ihr Ausbruch führt zu schweren wirtschaftlichen Verlusten in schweineproduzierenden Ländern. Eine schnelle

Identifizierung eines infizierten Schweines ist wichtig, um das Virus an seiner Ausbreitung zu hindern.

CSFV ist eng verwandt mit den Pestiviren, die die Bovine Virusdiarrhoe (BVD) und die Border Disease (BD) verursachen. Besonders auf

Schweinefarmen, die sich in der Nähe von BVD oder BD Herden befinden, kann eine Kreuzreaktion von Antikörpern gegen BVD oder BD zu falsch

positiven Resultaten in serologischen ELISAs führen. Um dies zu vermeiden, weist der Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit

Antikörper nach, welche gegen die A Domäne des E2 Proteins von CSFV gerichtet sind. Es ist bekannt, dass diese Domäne spezifischer für CSFV ist als

die B, C oder die D Domäne.

Der PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit weist Antikörper gegen hoch, mässig und schwach virulente CSFV-Stämme schon kurz nach der Infektion

nach. Der Nachweis der Antikörper von schwach virulenten CSFV-Stämmen ist von äusserster Wichtigkeit, um subklinische CSFV-Infektionen aufzuspüren.

Der PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit kombiniert ein einfaches Testverfahren mit hoher Sensitivität und Spezifität. Der PrioCHECK™ Porcine

CSFV Ab 2.0 Strip Kit ist auch für Labore mit einem hohen Durchsatz geeignet.

Testprinzip

Die Schlüsselkomponente des PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit ist ein monoklonaler Antikörper (mAk), der gegen ein Epitop auf der A

Domäne des Hüllproteins E2 (GP−55) von CSFV gerichtet ist. Die Bezeichnung E1 für das Hüllprotein (GP−55) von CSFV wurde durch das Internationale

Komitee für die Taxonomie von Viren versuchsweise in E2 abgeändert (Australien, September 1995). Die A Domäne ist spezifischer für den CSFV als die

B, C oder D Domäne.

Die Probe wird in einer Vertiefung der Testplatte in Verdünnungspuffer verdünnt und bei 37±1°C inkubiert. Anschliessend wird die Platte gewaschen,

das verdünnte Konjugat zugegeben und die Platte bei 37±1°C inkubiert. Nachdem die Platte erneut gewaschen wurde, wird das gebrauchsfertige

Chromogen (TMB) Substrat auf die Platte gegeben. Nach einer Inkubation bei 22±3°C wird die Farbentwicklung gestoppt. Die Absorption gemessen bei

450 nm ist umgekehrt proportional zu der Menge an Antikörpern gegen das klassische Schweinepestvirus.

Komponenten des Testkits

Packung mit 5 Platten für 450 Proben. Das Kit soll bis zum Verfallsdatum

bei 5±3°C aufbewahrt werden. Siehe Kit-Etikett für das jeweilige

Verfallsdatum. Die Haltbarkeit verdünnter, geöffneter oder

rekonstituierter Komponenten ist, wo nötig, nachstehend vermerkt.

Komponente

Beschreibung

1: Testplatte

Fünf Testplatten werden abgepackt in

Beuteln geliefert, welche Trocknungsmittel

entalten.

2: Konjugat (30x)

30x konzentriert, vor dem Gebrauch

verdünnen. Ein Fläschchen enthält 2,5 ml

Konjugat. Erst kurz vor Gebrauch verdünnen;

Konjugatverdünnung ist nicht stabil.

3: Konjugat

Verdünnungspuffer

Ein Fläschchen enthält 60 ml Konjugat

Verdünnungspuffer.

4: Waschpuffer (200x)

200x konzentriert, vor Gebrauch verdünnen.

Ein Fläschchen enthält 60 ml Waschpuffer.

Haltbarkeit der Waschlösung:

1 Woche bei 22±3°C.

5: Proben

Verdünnungspuffer

Gebrauchsfertig. Zwei Fläschchen enthalten

je 11,0 ml Proben Verdünnungspuffer.

6: Positivkontrolle

Gebrauchsfertig. Ein Fläschchen enthält

2,2 ml Positivkontrolle.

7: Schwachpositivkontrolle

Gebrauchsfertig. Ein Fläschchen enthält

2,2 ml Schwachpositivkontrolle.

8: Negativkontrolle

Gebrauchsfertig. Ein Fläschchen enthält

2,2 ml Negativkontrolle.

9: Chromogen (TMB)

Substrat

Gebrauchsfertig. Ein Fläschchen enthält

60 ml Chromogen (TMB) Substrat.

10: Stopplösung

Gebrauchsfertig. Eine Flasche enthält 60 ml

Stopplösung.

Weitere Kitbestandteile

• Gebrauchsinformation

• 10 Abdeckfolien

Zusätzlich benötigte Materialien und Geräte

Sofern nichts Gegenteiliges angegeben wurde, können alle Materialien auf

thermofisher.com bezogen werden.

Nutzung

Beschreibung

Allgemein

Laborausrüstung gemäss den nationalen Sicherheitsvorschriften

Inkubation

Mikrotiterplatten-Inkubator mit Temperaturregelung

(mindestens 50°C).

Auswertung

Platten Fotometer. Das Fotometer muss mit einem

geeigneten Filtersatz ausgerüstet sein, um die Absorption bei

450 nm messen zu können.

Optional

Plattenwascher.

Ablauf des Tests

Vorsichtsmassnahmen

• Nationale Sicherheitsvorschriften müssen befolgt werden.

• Der PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit muss in Laboratorien

durchgeführt werden, die für diesen Zweck geeignet sind.

• Proben müssen als potentiell infektiös betrachtet werden und alle mit

den Proben in Berührung kommenden Gegenstände als potentiell

kontaminiert erachtet werden.

Hinweise

Um optimale Ergebnisse mit dem PrioCHECK™ Porcine CSFV Ab 2.0 Strip

Kit zu erhalten, müssen folgende Aspekte beachtet werden:

• Das Testverfahren muss streng eingehalten werden.

• Alle Reagenzien des Kits müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur

(22±3°C) gebracht werden.

• Pipettenspitzen müssen nach jedem Pipettierschritt gewechselt werden.

• Für jedes Reagenz müssen eigene Behälter verwendet werden.

• Kitbestandteile dürfen nach ihrem Verfallsdatum oder bei einer

Änderung in ihrem Aussehen nicht mehr verwendet werden.

• Komponenten von verschiedenen Kit-Chargennummern dürfen nicht

gemischt werden

• Demineralisiertes Wasser oder Wasser gleicher Qualität verwenden.

thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion

thermofisher.com

25. September 2019

VorbereItung der Lösungen

Konjugatverdünnung

Konjugats (30x) (Komponente 2) 1:30 in Konjugat Verdünnungspuffer

(Komponente 3) verdünnen; für z.B 1 Platte wird eine Menge von 12 ml

benötigt. Hierzu werden 0,4 ml Konjugat (30x) in 11,6 ml Konjugat

Verdünnungspuffer verdünnt.

Hinweis: Die Gebrauchslösung darf erst kurz vor ihrer Verwendung

hergestellt werden.

Waschlösung

Der Waschpuffer (200x) (Komponente 4) muss mit demineralisiertem

Wasser 1:200 verdünnt werden. Eine Flasche reicht für ein Endvolumen

von 12 Liter.

Stabilität der Waschlösung: 1 Woche bei 22±3°C.

Zu beachten: Ungenügendes Waschen der Testplatte kann zu hohen

Hintergrundsignalen führen. Die Verwendung eines automatischen

Plattenwaschers ist dem Waschen mit Multikanalpipetten vorzuziehen.

Eine Einwirkzeit zwischen den Waschschritten ist nicht nötig. Ein

minimales Volumen von 200 µl pro Vertiefung ist ausreichend für ein

angemessenes Waschen der Platte.

Inkubation des Serums

1. 20 µl der Proben Verdünnungspuffers (Komponente 5) in der Platte

vorlegen.

2. 80 µl der Negativkontrolle (Komponente 8) in die Vertiefungen

A1 und B1 zugeben.

3. 80 µl der Schwachpositivkontrolle (Komponente 7) in die Vertiefungen

C1 und D1 zugeben.

4. 80 µl der Positivkontrolle (Komponente 6) in die Vertiefungen

E1 und F1 zugeben.

5. 80 µl der Proben in je eine (Einzelbestimmung) oder zwei

(Doppelbestimmung) benachbarte Vertiefungen der Testplatte

zugeben.

6. Testplatte mit Abdeckfolie schliessen.

7. Die Testplatte vorsichtig schütteln.

8. Die Testplatte für 60±5 Minuten bei 37±1°C inkubieren.

Inkubation mit dem Konjugat

1. Die Testplatte entleeren und 6 mal mit 200 bis 300 µl Waschlösung

waschen. Die Platte nach dem letzten Waschzyklus fest ausklopfen.

2. 100 µl der Konjugatverdünnung in alle Vertiefungen geben.

3. Testplatte mit Abdeckfolie schliessen.

4. Die Testplatte für 30±1 Minuten bei 37±1°C inkubieren.

Inkubation mit Chromogen (TMB) Substrat

1. Die Testplatte entleeren und die Platte 6-mal mit 200 bis 300 µl

Waschlösung waschen. Die Platte nach dem letzten Waschzyklus fest

ausklopfen.

2. 100 µl des Chromogen (TMB) Substrats (Komponente 9) in alle

Vertiefungen geben.

3. Inkubation der Testplatte für 20 Minuten bei 22±3°C.

4. 100 µl der Stopplösung (Komponente 10) zu allen Vertiefungen geben.

5. Testplatte vor der Messung vorsichtig schütteln.

Hinweis: Beginnen Sie mit der Zugabe der Stopplösung 20 Minuten nach

dem Befüllen der ersten Vertiefung mit Chromogen (TMB) Substrat.

Stopplösung in derselben Reihenfolge und mit der gleichen

Geschwindigkeit wie das Chromogen (TMB) Substrat zugeben.

Messen der testplatte und berechnung der ergebnisse

1. Die optische Dichte (OD) der Vertiefungen bei 450 nm wird innerhalb

von 15 Minuten nach Zugabe der Stopplösung gemessen.

2. Berechnung des mittleren OD450–Wertes der Negativkontrolle (Well A1

und B1). Das entspricht dem OD450 max Wert.

3. Berechnung der prozentualen Inhibition (PI) der Schwachpositiv-

kontrolle und Positivkontrolle der Proben gemäss der nachstehenden

Formel.

Der OD450 aller Proben wird als prozentuale Inhibition (PI) im Verhältnis

zum mittleren OD450 max der Negativkontrolle (well A2 und B1)

ausgedrückt.

PI = 100 − (OD450 Probe / OD450 max) × 100

Auswertung der Ergebnisse

Validitätskriterien

1. Der mittlere OD450–Wert der Negativkontrolle (Vertiefung A2 und B1)

muss >1,000 OD sein.

2. Die prozentuale Inhibition der Schwachpositivkontrolle muss

>50% sein.

3. Die prozentuale Inhibition der Positivkontrolle muss >80% sein.

Werden diese Kriterien nicht erfüllt, sind die Resultate ungültig und der

Test muss wiederholt werden.

Hinweis:

• Ist die OD450 einer Probe höher ist als die OD450 max, so kann dies als

0% Inhibition gewertet werden.

• Wenn der Mittelwert der Negativkontrolle unter 1,00 liegt, wurde das

Chromogen (TMB) Substrat vermutlich nicht bis auf Raumtemperatur

erwärmt. Erwärmen Sie in diesem Fall die Lösung vorher auf 22±3°C

oder inkubieren Sie das Chromogen (TMB) Substrat bis zu 30 Minuten

bevor die Farbreaktion gestoppt wird.

• Wenn der OD450-Mittelwert der Negativkontrolle über 2,00 liegt, wird

eine kürzere Inkubation mit dem Chromogen (TMB) Substrat

Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit Bedienungsanleitung

Marke: Thermo Fisher Scientific

Modell: PrioCHECK Porcine CSFV Ab 2.0 Strip Kit

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