Thermo Fisher Scientific VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit Bedienungsanleitung

Marke: Thermo Fisher Scientific

Modell: VetMAX Ear Notch Fast Lysis Kit

Typ: Bedienungsanleitung

VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit

Zur Gewinnung von Nukleinsäuren mittels Schnelllyse (zur Verwendung in der PCR)

Katalog-Nummer FLK

Pub.-Nr. MAN0010637 Vers. D.0

WARNUNG! Lesen Sie die Sicherheitsdatenblätter (SDB) und befolgen Sie die Anweisungen zur Handhabung. Tragen Sie eine

geeignete Schutzbrille sowie Schutzkleidung und -handschuhe. Sicherheitsdatenblätter (SDB) sind unter thermoﬁsher.com/

support verfügbar.

Produktbeschreibung

Bei dem Applied Biosystems™ VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit wird ein Schnelllyse-Schritt zur Extraktion der Nukleinsäuren verwendet.

Diese können ohne weitere Aufreinigung in der Real-Time PCR verwendet werden.

Ausführliche Anweisungen zur Verwendung des VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit mit kompatiblen VetMAX™ Real-Time PCR-Kits erhalten

Sie vom technischen Kundendienst.

Bestandteile und Lagerung

Tabelle 1 VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit (Kat.-Nr. FLK, 200 Reaktionen)

Inhalt Menge

Lagerung

Nach dem Erhalt (ungeöff-

net) Nach dem Öffnen

6a - Fast Lysis Concentrate (30X) (orangefarbenes Röhr-

chen) 4 × 500 µl -30 °C bis -10 °C -30 °C bis -10 °C

6b - Fast Lysis Diluent Buffer (weißes Fläschchen) 2 × 30 ml 2 °C bis 8 °C

Benötigtes, aber nicht mitgeliefertes Material

Sofern nichts Gegenteiliges angegeben wurde, können alle Materialien auf thermoﬁsher.com bezogen werden. MLS: Fisher Scientic

(ﬁsherscientiﬁc.com) oder anderer Hauptlieferant/Laborhändler.

Artikel Quelle

Labormischer, Vortexmischer oder vergleichbares Gerät MLS

Inkubator oder Heizblock, eingestellt auf 95 °C[1] MLS

Zwei Inkubatoren oder Heizblöcke, eingestellt auf 70 °C bzw. 90 °C[2] MLS

Einstellbare Mikropipetten (1 bis 1.000 µl) mit DNase-/RNase‑freien Filterspitzen MLS

Mikroröhrchen (mit dem verwendeten Inkubator bzw. Heizblock kompatibel) MLS

Nuclease-free Water (Nukleasefreies Wasser) (nicht DEPC-behandelt) AM9938

[1] Erforderlich für den 1-Heiz-Schritt-Arbeitsablauf.

[2] Erforderlich für den 2-Heiz-Schritte-Arbeitsablauf.

GEBRAUCHSINFORMATION

Für den Laborgebrauch.

Verfahrensrichtlinien

Richtlinien für das zu verwendende Probenmaterial

Probentyp Verfahren

Ohrstanzgewebe Fast Lysis Solution (FLS) direkt zum Gewebe im Probenröhrchen geben.

External positive control (EPC) (in VetMAX™ Real‑Time PCR-Kits enthalten) Angaben über das zu verwendende Volumen ﬁnden sich in der Ge-

brauchsinformation des VetMAX™ Kits.

Möglichkeiten der Probenlyse

Für die Schnelllyse von Ohrstanzgewebe mit dem VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit sind zwei Arbeitsabläufe verfügbar.

•1-Heiz-Schritt-Arbeitsablauf – 10 Minuten Erhitzen bei 95 °C.

•2-Heiz-Schritte-Arbeitsablauf – 30 Minuten Erhitzen bei 70 °C und 10 Minuten Erhitzen bei 90 °C.

Vorbereitung der Fast Lysis Solution (FLS)

1. Die folgenden Komponenten für die erforderliche Anzahl an Proben plus einem Volumenüberschuss von 10 % mischen.

FLS am Tag der Herstellung verwenden.

Komponente Volumen für 1 Probe Volumen für N Proben

6a - Fast Lysis Concentrate (30X) 10 µl N × 10 µl

6b - Fast Lysis Diluent Buffer 290 µl N × 290 µl

FLS insgesamt 300 µl N × 300 µl

2. Mit dem für Ihr Labor geeigneten Arbeitsablauf fortfahren.

•1-Heiz-Schritt-Arbeitsablauf – siehe “Probenlyse durch Erhitzen in einem Arbeitsschritt” auf Seite 2.

•2-Heiz-Schritte-Arbeitsablauf – siehe “Probenlyse durch den 2-Heiz-Schritte-Arbeitsablauf” auf Seite 3.

Probenlyse durch Erhitzen in einem Arbeitsschritt

1. Einen Heizblock oder Inkubator auf 95 °C vorheizen.

2. Jede Probe und Kontrolle wie in der folgenden Tabelle angegeben mit FLS mischen.

Hinweis: Sicherstellen, dass das gesamte Ohrstanzgewebe mit FLS bedeckt ist.

Probentyp Testprobe FLS

Probenmaterial oder EPC Siehe “Richtlinien für das zu verwendende Probenmaterial” auf

Seite 2 300 µl

Negativkontrolle (NCS) – 300 µl

3. (Optional) Jede Probe sofort 15 Sekunden lang mit dem Vortexmischer mischen.

Alternativ das Ohrstanzgewebe mit FLS bedecken und dann das FLS über das Gewebe pipettieren.

4. Die Proben 10 Minuten bei 95 °C inkubieren.

5. Die Lysate 10 Minuten bei -20 °C oder 2 bis 8 °C abkühlen, um eine Kreuzkontamination während Real-Time RT-PCR zu vermeiden.

6. (Optional) Die Lysate 1 Minute bei 4.000 × g zentrifugieren.

Das Lysat ist nun für die Real-Time RT-PCR mit einem kompatiblen VetMAX™ Kit vorbereitet.

• Das Lysat für maximal 6 Stunden auf Eis bzw. bei 2 bis 8 °C aufbewahren. Zur Langzeitlagerung bei unter -16 °C aufbewahren.

• RT-PCR mit 5 µl Lysat durchführen.

2VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit Gebrauchsinformation

Probenlyse durch den 2-Heiz-Schritte-Arbeitsablauf

1. Einen Heizblock oder Inkubator auf 70 °C und den zweiten auf 90 °C vorheizen.

2. Jede Probe und Kontrolle wie in der folgenden Tabelle angegeben mit FLS mischen.

Hinweis: Sicherstellen, dass das gesamte Ohrstanzgewebe mit FLS bedeckt ist.

Probentyp Testprobe FLS

Probenmaterial oder EPC Siehe “Richtlinien für das zu verwendende Probenmaterial” auf

Seite 2 300 µl

Negativkontrolle (NCS) – 300 µl

3. (Optional) Jede Probe sofort 15 Sekunden mit dem Vortexmischer mischen.

Alternativ das Ohrstanzgewebe mit FLS bedecken und dann das FLS über das Gewebe pipettieren.

4. Die Proben 30 Minuten bei 70 °C inkubieren.

WICHTIG! Es ist sehr wichtig, dass die Proben so schnell wie möglich auf 70 °C erhitzt werden. Wird ein Inkubator verwendet,

müssen die Röhrchen mit ausreichendem Abstand eingesetzt werden, damit ein ausreichender Luftstrom möglich ist.

5. Die Proben zügig in den auf 90 °C vorgeheizten Inkubator oder Heizblock überführen und die Proben 10 Minuten inkubieren.

Die Röhrchen dürfen sich beim Überführen nicht abkühlen.

6. Eine der folgenden Methoden verwenden, um eine Kreuzkontamination in der Real-Time RT‑PCR zu vermeiden.

• Die Lysate 5 Minuten durch Lagerung bei 2 bis 8 °C abkühlen.

• Die Lysate 1 Minute bei 4.000 × g zentrifugieren.

Das Lysat ist nun für die Real-Time RT-PCR mit einem kompatiblen VetMAX™ Kit vorbereitet.

• Zur direkten Weiterverarbeitung das Lysat auf Eis bzw. bei 2 bis 8 °C aufbewahren. Bei Lagerung unter -16 °C ist das Lysat bis zu

6 Monate haltbar.

• RT-PCR mit 5 µl Lysat durchführen.

Eingeschränkte Produktgarantie

Life Technologies Corporation und/oder seine Tochtergesellschaft(en) gewährleisten ihre Produkte gemäß den allgemeinen Verkaufs- und

Lieferbedingungen von Life Technologies, die unter www.thermoﬁsher.com/us/en/home/global/terms-and-conditions.html

eingesehen werden können. Bitte wenden Sie sich bei Fragen unter www.thermoﬁsher.com/support an Life Technologies.

Laboratoire Service International (LSI) | 6 Allée des Écureuils | Parc Tertiaire du Bois-Dieu | 69380 Lissieu, Frankreich

Beschreibungen der Symbole auf Produktetiketten oder in Produktdokumenten ﬁnden Sie unter thermoﬁsher.com/symbols-deﬁnition.

Inhaltliche Änderungen dieses Leitfadens behalten wir uns ohne Ankündigung vor.

HAFTUNGSAUSSCHLUSS: IN DEM GESETZLICH ZUGELASSENEN UMFANG HAFTET THERMO FISHER SCIENTIFIC INC. UND/ODER SEINE TOCHTERUNTERNEHMEN NICHT FÜR

BESONDERE, VERSEHENTLICHE, INDIREKTE, STRAFBARE, MEHRERE ODER FOLGESCHÄDEN IN VERBINDUNG MIT ODER HERVORGEHEND AUS DIESEM DOKUMENT,

EINSCHLIESSLICH IHRER NUTZUNG DIESES DOKUMENTS.

Übersetzung der englischen Publikation mit der Nummer MAN0009603 Version C.0.

Revisionshistorie: Pub. Nr. MAN0009603

Version Datum Beschreibung

C.0 17. März 2020 Einstuﬁges Erhitzungsverfahren mit nur einem Arbeitsschritt zum Erhitzen von Proben hinzugefügt.

B.0 2. Oktober 2019

• Der Produktname wurde von MagMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit in VetMAX™ Ear Notch Fast Lysis Kit geändert.

• Die Informationen zur eingeschränkten Lizenz wurden aktualisiert.

A.0 8. März 2017 Auf die neueste Dokumentvorlage aktualisiert, mit zugehörigen Aktualisierungen zu Gewährleistungen, Marken und Logos.

1.0 11. Oktober 2013 Ausgangspunkt für Revisionshistorie.

Wichtige Lizenzinformationen: Für diese Produkte gelten unter Umständen eine oder mehrere Lizenzen zur eingeschränkten Nutzung („Limited Use Label License“). Mit der

Verwendung dieser Produkte erklären Sie sich mit den Bedingungen und Bestimmungen aller anwendbaren Lizenzen zur eingeschränkten Nutzung einverstanden.

thermoﬁsher.com/support | thermoﬁsher.com/askaquestion

thermoﬁsher.com

19 März 2020