Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Trichinella AAD Kit Bedienungsanleitung

Marke: Thermo Fisher Scientific

Modell: PrioCHECK Trichinella AAD Kit

Typ: Bedienungsanleitung

Für den Laboreinsatz.

GEBRAUCHSINFORMATION

PrioCHECK™ Trichinella AAD Kit

Artifizielle Verdaumethode zum

in vitro

Nachweis von

Trichinella

spp. Larven in Fleischproben

Katalog-Nummer 7620040

Pub. Nr. MAN0015722 Version

A.0

WICHTIG!

In Argentinien folgen Sie Anhang A, „Richtlinien für die Sedimentation von gefrorenen Proben für Argentinien“.

ACHTUNG! Bitte die Sicherheitsdatenblätter (SDB) lesen und Handlungsanweisungen befolgen. Es ist angemessene persönliche Schutzausrüstung

(PSA) zu tragen (Brille, Kleidung, Handschuhe). Die Sicherheitsdatenblätter (SDB) sind abzurufen unter thermofisher.com/support.

ACHTUNG! POTENZIELLE BIOGEFAHR.

Informieren Sie sich auf der jeweiligen Produktwebsite (unter thermofisher.com) über biologische

Gefahren, die von dem Produkt ausgehen können. Tragen Sie eine geeignete Schutzbrille sowie Schutzkleidung und -handschuhe.

Einleitung

Die Trichinellose wird durch die Nematode Trichinella verursacht und ist eine Zoonose, die weltweit auftritt und ein breites Spektrum unterschiedlicher

Spezies, einschließlich Säuger, Vögel und Reptilien, befällt. Gegenwärtig sind 12 unterschiedliche Taxa dieser Gattung bekannt. Die Arten von vorrangiger

Bedeutung in Europa sind Trichinella spiralis, Trichinella britovi, Trichinella pseudospiralis und Trichinella nativa. Trichinella spiralis tritt in gemäßigten Zonen bei

Nutztieren (Schweine, Pferde) auf und kann auch bei Tieren nachgewiesen werden, die in engem Kontakt zu diesen Nutztieren stehen (z.B. Hunde, Katzen,

Ratten). Trichinella britovi tritt hauptsächlich bei Wildtieren auf. Trichinella pseudospiralis ist weltweit verbreitet und findet sich auch bei Vögeln. Trichinella

Infektionen bei Schweinen stellen ein bedeutendes Problem dar, da sich Menschen durch den Verzehr von rohem oder unzureichend gekochtem Fleisch

infizieren können.

Die artifizielle Verdaumethode stellt das derzeit empfohlene Verfahren zum Nachweis von Trichinella Larven in Fleisch dar. Gemäß der EG-Verordnung

2015/1375 muss jedes für den menschlichen Verzehr bestimmte Einzeltier auf Trichinella spp. Larven getestet werden. Dazu wird das Fleisch der Einzeltiere

gepoolt und mit Hilfe des artifiziellen Verdaus auf Trichinella Larven getestet.

Der Applied Biosystems™ PrioCHECK™ Trichinella AAD Kit ist eine alternative Verdaumethode. Es handelt sich um eine verlässliche und schnelle

Methode zum Nachweis von Trichinella Larven in Fleisch, die auch für einzelne Schlachtkörper verwendet werden kann.

Testprinzip

Pro untersuchtem Pool können bis zu 115 g Fleisch untersucht werden. Dazu werden Fleischstücke von ca. 1 g, z.B. aus dem Zwerchfell, miteinander gemischt.

Verdaupuffer und Enzymlösung werden nachfolgend zu den Fleischstücken zugegeben. Der Verdau erfolgt bei 60°C. Nach anschließender Sedimentation und

Waschschritten, wird die Lösung unter einem Trichinoskop oder einem Stereomikroskop (15- bis 20-fache Vergrößerung) auf Larven untersucht.

Der PrioCHECK™ Trichinella AAD Kit verwendet eine Serin-Endopeptidase aus der Gruppe der Subtilisine Da keine Salzsäure beim Verdau verwendet

wird, handelt es sich, verglichen mit der traditionellen artifiziellen Verdaumethode, um ein aus Sicht des Arbeitsschutzes sicheres Verfahren.

Komponenten des Kits

Kit für 4 000 Assays / bis zu 400 000 Einzeltiere. Das Kit kann bei 0–25°C

bis zum Verfallsdatum aufbewahrt werden. Das Verfallsdatum ist auf dem

Etikett des Kits vermerkt. Die Haltbarkeit von verdünnten, geöffneten oder

gelösten Komponenten ist gegebenenfalls nachstehend vermerkt.

Komponente

Beschreibung

1: Verdaupuffer (20x)

Achtzig (80) Flaschen mit je 5 l Verdaupuffer.

Vor Gebrauch vorsichtig schütteln.

2: Enzymlösung

Gebrauchsfertig. Vierzig (40) Flaschen mit je 5 l

Enzymlösung.

3: Verdaupufferadditiv

Gebrauchsfertig. Fünf (5) Flaschen mit je 1 l

Verdaupufferadditiv.

Zusätzliche Kitbestandteile

Gebrauchsinformation

Zusätzlich benötigtes Material

Sofern nichts Gegenteiliges angegeben wurde, können alle Materialien auf

thermofisher.com bezogen werden.

Nutzung

Beschreibung

Allgemein

Laborausrüstung gemäß den nationalen

Sicherheitsvorschriften.

• Wasser

•Becherglas, 3 Liter oder Erlenmeyerkolben, 3 Liter

• Pipette oder Flaschenaufsatz-Dispenser

• Thermometer auf 0,5°C genau im Bereich zwischen

1°C und 100°C

•

Edelstahlsieb, Maschengröße 180 Mikromete

Sondermate

rialien

•

Scheidetrichter nach Squibb; Pyrex; Kapazität 2000–3000 ml;

Absperrhahn Stopcock Nr. 6; konischer Standardstöpsel Nr.

38; mit Polyethylenstöpsel und PTFE Absperrhahn ; z.B.

Fisher Scientific, Katalognummer 10-437-5F

• Glaszylinder oder Glasröhrchen , Kapazität 80 ml,

Durchmesser × Länge: 40 × 115 mm

Probenvorbe

reitung

•

Mixer

Analyse der

Ergebnisse

•

Stereomikroskop mit 15- bis 20-facher Vergrößerung oder

Trichinoskop

• Petrischale für Stereomikroskop oder Larvenzählbecken für

Trichinoskop (gemäß EG 2015/1375)

Protokol

Vorsichtsmaßnahmen

• Nationale Sicherheitsvorschriften müssen befolgt werden.

• Beim Arbeiten mit Tierproben müssen die jeweils gültigen nationalen

Richtlinien befolgt werden.

• Der PrioCHECK™ Trichinella AAD Kit muss in für diesen Zweck

geeigneten Laboratorien durchgeführt werden. Proben müssen als

potentiell infektiös betrachtet und alle mit den Proben in Berührung

gekommenen Gegenstände als potentiell kontaminiert erachtet werden.

Hinweise

Um optimale Ergebnisse mit dem PrioCHECK™ Trichinella AAD Kit zu

erhalten, müssen folgende Hinweise beachtet werden:

• Das Testverfahren muss strikt eingehalten werden.

• Kitbestandteile verschiedener Kit-Chargennummern dürfen nicht

zusammen verwendet werden.

• Die Verdaulösung muss während des Verfahrens eine Temperatur von

60°C ± 2°C haben.

thermofisher.com/support | thermofisher.com/askaquestion

thermofisher.com

2. Oktober 2018

Probenvorbereitung

Zum Schneiden der Proben Messer oder Schere und Pinzette verwenden.

Vorbereitungsschritte

1. Proben mit Messer oder Schere schneiden.

2. Proben poolen, maximal 115 g pro Gewebepool verwenden.

Z.B. für Schweine: bis zu 115 Stücke mit je 1 g Zwerchfell werden gepoolt.

Informieren Sie sich bitte in der offiziellen EG-Verordnung 2015/1375 über

die Details für die einzelnen Spezies.

Hinweis: Die Verwendung von 100 bis 115 g Gewebe pro Pool wird

empfohlen. Wird weniger als 100 g Gewebe verwendet, müssen die

Volumen von Verdaupuffer, Arbeitslösung, Enzymlösung und

Waschpuffer entsprechend angepasst werden. Es dürfen nicht weniger als

10 g Probenmaterial verwendet werden.

Artifizieller Verdau

1. Im Gefäß für den Verdau (z.B. Becherglas) 2 l 1x Verdaupufferdurch

Mischen von 100 ml (± 5 ml) Verdaupuffer (20x) und 1900 ml

Wasserherstellen.

Hinweis: Vorgewärmtes Wasser (60°C ± 2°C) kann verwendet werden

um die Aufheizzeit in Schritt 4 zu verkürzen.

2. 0,5–1 ml Verdaupufferadditiv zugeben.

3. 50 ml ± 2 ml Enzymlösung zugeben.

4. Auf eine Temperatur von 60°C ± 2°C erhitzen.

5. Die Fleischproben gründlich zerkleinern und das zerkleinerte Fleisch

zur Verdaulösung geben. Reste des zerkleinerten Fleischs mit einem

geeignten Volumen der Verdauflüssigkeit herausspülen.

Hinweis: Den Mixer mit Wasser auswaschen bevor eine weitere Probe

verdaut wird.

6. Unter starkem Rühren (≥750 upm) 20 min ± 2 min bei 60°C ± 2°C

inkubieren. Das Gefäß für den Verdau z.B. durch Aluminiumfolie

isolieren, um einen Wärmeverlust zu vermeiden.

Hinweis: Während des Rührvorgangs muss die Verdauflüssigkeit mit

so hoher Geschwindigkeit gerührt werden, dass ein tiefer Wirbel

entsteht, ohne dass Flüssigkeit herausspritzt. Vergewissern Sie sich,

dass die Rührgeschwindigkeit ausreicht, um das Fleisches in

Suspension zu halten. Dies verhindert einemunzureichenden Verdau.

7. Die Verdauflüssigkeit durch das Edelstahlsieb in den Scheidetrichter

gießen (Spezifikation im Abschnitt „Zusätzlich benötigte Materialien“).

8. Das Becherglas gründlich mit Wasser ausspülen (maximal mit einem

Volumen von 300 ml). Das Wasser durch das Edelstahlgewebe in den

Scheidetrichter gießen.

9. Das Edelstahlsieb unter Verwendung einer Spritzflasche gründlich mit

Wasser ausspülen.

Hinweis: Der Verdau wird als ausreichend erachtet, wenn nicht mehr

als 5 % des Ausgangsprobengewichts im Sieb verbleibt.

10. Sicherstellen, dass der Scheidetrichter vertikal ausgerichtet ist.

11. Zur Sedimentation die Verdauflüssigkeit für 30 min ± 2 min im

Scheidetrichter stehen lassen.

Hinweis: In Argentinien kann die Sedimentationszeit für zuvor

gefrorene Proben gemäß Anhang A, „Richtlinien für die Sedimentation

von gefrorenen Proben für Argentinien“, variieren.

12. Nach der Sedimentation 75 ml der Verdaulösung schnell in das

Glasröhrchen (den Glaszylinder) ablaufen lassen (Spezifikation im

Abschnitt „Zusätzlich benötigte Materialien“).

13. Die abgelassene Flüssigkeit zur weiteren Sedimentation für

10 min ± 1 min stehen lassen.

14. 65 ml des Überstandes durch vorsichtiges Ansaugen der oberen Phase

entfernen. Nicht mehr als 10 ml Volumen im Glaszylinder oder

Glasröhrchen zurücklassen.

Nachweis

1. Die restlichen 10 ml in ein Larvenzählbecken oder eine Petrischale

gießen. Den Glaszylinder (das Glasröhrchen) mit nicht mehr als 10 ml

Wasser ausspülen. Das Wasser zur Probe im Larvenzählbecken oder

der Petrischale geben.

2. Anschließend die Probe im Trichinoskop oder Stereomikroskop bei

einer 15- bis 20-fachen Vergrößerung untersuchen

Hinweis: Tritt ein verdächtiger Bereich oder eine Parasiten-ähnliche Form

auf, muss eine 60- bis 100-fache Vergrößerung verwendet werden.

Anmerkung: Die gewonnenen Larven werden während des artifiziellen

Verdaus getötet. Die DNA der isolierten Larven ist intakt und kann unter

Verwendung von Standardmethoden zur Bestimmung von Art / Genotyp

verwendet werden.

Da die Larven während des Verdaus bei 60°C ± 2°C getötet werden,

müssen positiv getestete Flüssigkeiten Verdausaft, Überstand,

Waschungen, etc.) nicht durch Hitze inaktiviert werden werden.

Interpretation der Ergebnisse

• Falls bei der Untersuchung im Trichinoskop oder Stereomikroskop

keine Larven gefunden werden wird die Probe als negativ eingestuft.

• Falls Larven bei der Untersuchung im Trichinoskop oder

Stereomikroskop gefunden werden, wird die Probe als positive

eingestuft.

Hinweis: Abhängig von den nationalen Bestimmungen müssen die

gefundenen Larven zur Identifikation auf Artebene an das Nationale

Referenzlaboratorium für Trichine geschickt werden. Falls weitere

Untersuchungen gemäß gegebener Regulation erlaubt bzw. von Nöten

sind, ist eine Identifizierung der Larvenarten mit Hilfe der PCR Technik

Thermo Fisher Scientific PrioCHECK Trichinella AAD Kit Bedienungsanleitung

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Modell: PrioCHECK Trichinella AAD Kit

Typ: Bedienungsanleitung

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Bericht

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