Roche uPath IVD Benutzerhandbuch

Marke: Roche

Modell: uPath IVD

Typ: Benutzerhandbuch

Handbuch zur Anwendung des uPath

HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus

für Brustgewebe

Inhaltsverzeichnis

Einleitung 1

Zusammenfassung und Erklärung des Algorithmus 2

Verwendungszweck 3

Verwendungszweck des Produkts 3

Zweck dieses Algorithmus-Handbuchs 3

Klinische Bedeutung 4

Testprinzip 5

Einschränkungen 6

Netzwerkmerkmale 7

Datensicherheit 8

Arbeitsablauf bei der Verwendung des uPathHER2(4B5) Algorithmus 9

Arbeitsablauf für Pathologen 11

Färbungsmerkmale 18

Bewertung des VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörpers 18

Bewertung der Färbung mit dem uPathHER2(4B5) Algorithmus 18

Leistungsmerkmale 30

Methodenvergleich 30

Pathologen-Reproduzierbarkeitsstudien 31

Scanner-Reproduzierbarkeitsstudien 32

Fehlerbehebung 33

Literatur 37

Einleitung

Die Roche uPathenterprisesoftware (uPathenterprisesoftware)

mit dem uPathHER2(4B5) Bildanalyse-Algorithmus für

Brustgewebe (uPathHER2(4B5) Algorithmus) ist ein

Softwaresystem zur Unterstützung der semiquantitativen

Auswertung der Expression des Proteins humaner epidermaler

Wachstumsfaktor-Rezeptor2 (HER2) in immunhistochemisch

gefärbten histologischen Schnitten von formalinﬁxiertem,

parafﬁneingebettetem (FFPE) normalem und neoplastischem

Gewebe.

Die uPathenterprisesoftware ist eine digitale Software-

Komplettlösung für die Pathologie zur Erfassung, Verwaltung,

Ansicht, Analyse, Weitergabe und Befunderstellung

digitaler Darstellungen von Pathologieproben. Mit der uPath

enterprise software können digitale Bilder in verschiedenen

Vergrößerungen dargestellt, Anmerkungen zugewiesen,

Gewebeschnitte vermessen, Bildanalysen durchgeführt und

Berichte erstellt werden.

Hinweis: Der uPathHER2(4B5) Bildanalyse-Algorithmus

für Brustgewebe ist eine ergänzende, computergestützte

Methodologie zur Unterstützung der Erfassung und Vermessung

der mikroskopischen Darstellung von Objektträgern mit

Brustgewebeproben nach immunhistochemischer Färbung

zur Feststellung des Vorhandenseins von HER2-Protein. Es ist

Aufgabe des Pathologen, die Validität der Bildanalyse-Scores zu

veriﬁzieren und geeignete Kontrollen gemäß dem Methodenblatt

für den VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper (verfügbar

auf dialog.roche.com) zu verwenden.

1 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Zusammenfassung und Erklärung des Algorithmus

Für die Bildanalyse mit der uPathenterprisesoftware werden

eine oder mehrere Zielregionen (ROIs) ausgewählt und markiert.

Jede ROI kann in verschiedenen Vergrößerungen angezeigt und

mithilfe des uPathHER2(4B5) Algorithmus analysiert werden.

Die Gesamtzahl der Ziel-Tumorzellen wird quantiﬁziert, und

die Tumorzellen werden ihrem Färbestatus (gefärbt oder nicht

gefärbt) entsprechend stratiﬁziert. Gefärbte Zellen werden

nach Färbeintensität und Vollständigkeit der Membranfärbung

stratiﬁziert. Der uPathHER2(4B5) Algorithmus kombiniert die

folgenden Parameter, um einen HER2-Score von 0 bis 3+ zu

ermitteln: den prozentualen Anteil der gefärbten Zellen (gefärbt,

ungefärbt), die Färbeintensität (schwach, mittelstark, stark) und

die Vollständigkeit der Membranfärbung (ungefärbt, teilweise,

vollständig). Der uPathHER2(4B5) Algorithmus kann einen

Score für eine bestimmte ROI oder einen zusammenfassenden

Score für alle gewählten ROIs auf diesem Objektträger

erstellen. Der Pathologe kann den vom uPathHER2(4B5)

Algorithmus vorgeschlagenen Score übernehmen oder den

vorgeschlagenen Score mit einem anderen Score überschreiben.

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus führt keine unabhängige

Dateninterpretation durch und sollte daher nur von qualiﬁzierten

Pathologen und im Zusammenhang mit einer histologischen

Untersuchung, relevanten klinischen Daten und geeigneten

Kontrollen angewendet werden. Der uPathHER2(4B5)

Algorithmus ist zur Unterstützung des Pathologen bei der

Beurteilung der HER2-Proteinexpression in Brustgewebeproben

nach Färbung mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5)

Antikörper bestimmt.

2 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Verwendungszweck des Produkts

Der uPathHER2(4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

unterstützt Pathologen beim semiquantitativen Nachweis von

HER2-Protein in formalinﬁxiertem, parafﬁneingebettetem,

neoplastischem Brustgewebe. Bei Anwendung zusammen

mit VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Rabbit Monoclonal

Primary Antibody (VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper)

ist er auch als Unterstützung bei der Beurteilung von

Brustkrebspatienten angezeigt, bei denen eine Behandlung mit

Herceptin

(Trastuzumab), KADCYLA

(Trastuzumab-Emtansin)

oder PERJETA

(Pertuzumab) erwogen wird.

Hinweis: Der uPathHER2(4B5) Bildanalyse-Algorithmus

für Brustgewebe ist eine ergänzende, computergestützte

Methodologie zur Unterstützung der Erfassung und Vermessung

der mikroskopischen Darstellung von Objektträgern mit

Brustgewebeproben nach immunhistochemischer Färbung

zur Feststellung des Vorhandenseins von HER2-Protein. Es ist

Aufgabe des Pathologen, die Validität der Bildanalyse-Scores zu

veriﬁzieren und geeignete Kontrollen gemäß dem Methodenblatt

für den VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper zu

verwenden.

Dieser Algorithmus ist für die Verwendung in der In-vitro-

Diagnostik (IVD) bestimmt.

Verwendungszweck

Zweck dieses Algorithmus-Handbuchs

Dieses Handbuch für den uPathHER2(4B5) Algorithmus

(Algorithmus-Handbuch) dient folgenden Zwecken:

• Bereitstellung von Basisinformationen zum Verwendungszweck

des uPathHER2(4B5) Algorithmus, zu Testprinzipien und

Testbeschränkungen;

• Beschreibung der notwendigen Anforderungen an Materialien,

IT, Datensicherheit und Netzwerk;

• Schritt-für-Schritt-Beschreibung der Verwendung des

uPathHER2(4B5) Algorithmus;

• Darstellung der korrekten Verwendung des uPathHER2(4B5)

Algorithmus anhand von Bildmaterial;

• Bereitstellung eines Werkzeugs, das die Verwendung

des uPathHER2(4B5) Algorithmus bei der Analyse von

Schnitten von FFPE-Brustgewebe nach Anfärbung mit dem

VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper erleichtert;

• exemplarische Darstellung von Bildmaterial zur Verwendung

des uPathHER2(4B5) Algorithmus bei der Bewertung von

schwierigen Fällen;

• Beschreibung der Leistungsmerkmale des uPathHER2(4B5)

Algorithmus.

3 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Klinische Bedeutung

Brustkrebs ist die häuﬁgste Krebserkrankung bei Frauen

und die zweithäuﬁgste krebsbedingte Todesursache.

1,2

Nordamerika beträgt die Wahrscheinlichkeit, dass eine Frau an

Brustkrebs erkrankt, 12,5%.

Früherkennung und geeignete

Therapien können die Lebenserwartung erheblich verlängern.

3,4

Immunhistochemische (IHC) Routineuntersuchungen

lassen sich vor allem mit kleinen Gewebeproben ohne

Weiteres durchführen, sodass diese Technik in Kombination

mit Antikörpern zum Nachweis von Antigenen, die für die

Karzinominterpretation wichtig sind, ein effektives Hilfsmittel

des Pathologen bei der Diagnose und Prognose des Tumors

darstellt. Das Onkoprotein HER2 ist mittlerweile einer der

wichtigsten Marker für Brustkrebs.

5,6,7,8

Die Arzneimittel

Herceptin (Trastuzumab), KADCYLA (Trastuzumab-Emtansin)

und PERJETA (Pertuzumab) sind bei manchen Patienten mit

Brustkrebs wirksam, indem sie das Wachstum des Tumors zum

Stillstand bringen und mitunter sogar zur Rückbildung des

Tumors führen.

5,6,7,8,9

Bei den Wirkstoffen handelt es sich um

humanisierte monoklonale Antikörper, die an das HER2-Protein

auf Krebszellen binden.

5,8,9,10

In-vitro-Diagnostika zur Beurteilung des HER2-Status bei

Brustkrebspatienten sind wichtig, um den Arzt bei der Festlegung

einer gegen HER2 gerichteten Therapie zu unterstützen.

5,6,7,8

Der

VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper ist zur Verwendung

beim IHC-basierten Nachweis der HER2-Proteinexpression bei

Brustkrebs bestimmt. Der uPathHER2(4B5) Algorithmus wird

ergänzend zu dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper

zur Unterstützung bei der Beurteilung von Brustkrebspatienten

eingesetzt, bei denen eine Behandlung mit Herceptin

(Trastuzumab), KADCYLA (Trastuzumab-Emtansin) oder

PERJETA (Pertuzumab) erwogen wird.

4 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Testprinzip

Kriterien der Intensität und des Musters der

Zellmembranfärbung für den Score des uPathHER2(4B5)

Algorithmus:

Färbemuster Score Beurteilung

der HER2-

Färbung

Keine Membranfärbung beobachtet 0 Negativ

Blasse, teilweise Färbung

der Membran bei beliebigen

Krebszellen

1+ Negativ

Schwache bis mittelstarke,

vollständige Färbung der Membran,

>10% der Krebszellen

2+ Nicht eindeutig*

Intensive, vollständige Färbung der

Membran, >10% der Krebszellen

3+ Positiv

* Rückgriff auf ISH wird empfohlen

Die uPathenterprisesoftware mit dem uPathHER2(4B5)

Algorithmus ermittelt HER2-Scores auf Grundlage von

Bildanalysetechniken.

Nach Anfärbung mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5)

Antikörper weist der uPathHER2(4B5) Algorithmus den

Geweben auf Grundlage von vordeﬁnierten Parametern einen

Score zu.

Bildanalyseschritte:

• Nachweis von Zellen im Gesamtbild.

• Einstufung von Zellen als Tumorzellen oder andere Zelltypen.

• Erkennung von gefärbten Membranen und Stratiﬁzierung in

Kategorien: teilweise oder vollständige Membranfärbung sowie

schwache, mittelstarke oder starke Färbeintensität.

• Die Berechnung des HER2-Scores erfolgt durch

Kombination von Zelleinstufung, Färbeintensität und

Membranklassiﬁzierung.

So identiﬁziert der HER2-Bildanalysealgorithmus

Tumorzellen und berechnet den Score:

• Der uPathHER2(4B5) Algorithmus erkennt Tumorzellen an

der Farbe, der Intensität, der Größe und auf der Grundlage

morphologischer Aspekte.

• Die Einstufung der identiﬁzierten Tumorzellen als gefärbt erfolgt

auf Grundlage der festgestellten Membranstrukturen und der

vorbestimmten Schwellenwerte.

• Die Berechnung des HER2-Scores durch den uPathHER2(4B5)

Algorithmus erfolgt auf Grundlage der erkannten gefärbten

Zellen. Die Software stuft diese Zellen nach Intensität und

Vollständigkeit der Färbung ein.

5 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus ist für die Verwendung in

Verbindung mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper

bestimmt. Die Testergebnisse sind immer nur so gut wie die

Qualität und Genauigkeit des dargestellten IHC-Objektträgers

und des analysierten Bildes.

Die Färbung mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper

muss durch manuelle mikroskopische Untersuchung der

HER2-Kontrollobjektträger validiert werden, um zu bestätigen,

dass die erhaltenen Ergebnisse den Erwartungen entsprechen,

bevor Bilder von Objektträgern in die uPathenterprisesoftware

geladen und analysiert werden.

Bei der Anwendung des VENTANAanti-HER2/neu(4B5)

Antikörpers müssen alle Herstellerempfehlungen eingehalten

werden, darunter die Verwendung aller Positiv- und

Negativkontrollmaterialien bei jedem Färbelauf. Sind die

Ergebnisse der Kontrollobjektträger bei der manuellen

mikroskopischen Untersuchung nicht akzeptabel, dann müssen

die Gewebe erneut gefärbt und die Ergebnisse auf Akzeptanz

geprüft werden.

Es sind die Auswertungsempfehlungen bei Anwendung des

VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörpers zu beachten.

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus ist für die Verwendung

durch qualiﬁzierte Pathologen im Zusammenhang mit einer

histologischen Untersuchung, relevanten klinischen Daten und

geeigneten Kontrollen bestimmt. Er ist kein eigenständiges Tool

und erfordert den Eingriff durch geschulte Personen während

des Analyseprozesses.

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus kann falsche Ergebnisse

liefern, wenn die erfassten Gewebe anomal gefärbt sind

(z.B. nukleäre Färbung, Pigmentierung usw.).

Längliche Tumorzellkerne werden vom uPathHER2(4B5)

Algorithmus, unabhängig von der Zellform insgesamt,

möglicherweise von der Berechnung ausgenommen. Aus

diesem Grund müssen Tumore mit vielen Zellen mit verlängerten

Zellkernen unter Umständen manuell ausgewertet werden.

Bei der Entwicklung, Programmierung und Validierung des

uPathHER2(4B5) Algorithmus wurden folgende Materialien

verwendet: invasive lobuläre, duktale, muzinöse, medulläre,

papilläre und mikropapilläre Karzinome und einige wenige

metastatische Läsionen.

Die Verwendung des uPathHER2(4B5) Algorithmus an einem PC

bzw. Heimcomputer wurde nicht geprüft, und die Sicherheit und

Effektivität einer solchen Verwendung wurden nicht validiert.

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus identiﬁziert DAB-gefärbte

Membranen jeglicher Intensität und Vollständigkeit der Färbung.

Der Schwellenwert zum Ausschluss von unspeziﬁschem

Signal liegt bei 0,5% aller Tumorzellen, um einen Fall mit 1+ zu

bewerten. Die Bildanalyse folgt daher nicht den Empfehlungen

des Methodenblatts, das ab dem Schwellenwert „1 Zelle“ den

Score „1+“ fordert. Daher ist es möglich, dass in einigen Fällen,

bei denen die Membran einiger weniger Zellen angefärbt wurde,

der Score „0“ (und nicht „1+“) lautet. Der Schwellenwert zum

Ausschluss von unspeziﬁschem Signal wurde gewählt, damit

nachweislich negative Fälle mit „0“ bewertet werden.

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus weist eine hohe Sensitivität

für Braunfärbung (DAB-Färbung) auf, damit auch die

schwächste Membranfärbung erkannt wird. Aus diesem Grund

kann der Score für Gewebeproben mit braunen Artefakten (wie

etwa aufgrund von Pigmentierung, Hintergrundfärbung von

Muskelfasern und anderen braunen Färbungsartefakten) falsch

sein. Die uPath enterprise software verfügt über Tools, mit denen

Pathologen davon betroffene Bereiche ausschließen können.

Dies wird im Abschnitt Färbungsmerkmale ausführlicher

diskutiert.

Der uPathHER2(4B5) Algorithmus weist eine hohe Sensitivität

für Fälle mit Einstufung 2+ auf. Aus diesem Grund kann es

vorkommen, dass der uPathHER2(4B5) Algorithmus Fälle mit

Einstufung 1+ fälschlicherweise als 2+ wertet. Insbesondere

können Fälle mit Einstufung 1+ mit etwas weniger als 10%

Tumorzellen mit vollständiger Färbung oder Fälle mit einer

hohen Anzahl an Tumorzellen mit zytoplasmatischer Färbung

fälschlicherweise als 2+ gewertet werden. In diesen speziellen

Fällen muss der Pathologe möglicherweise den Score

überschreiben. Zytoplasmatische Färbung wird im Abschnitt

über die Färbungseigenschaften ausführlicher erörtert.

Einschränkungen

6 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

7 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Netzwerkmerkmale

Es wird eine Netzwerkverbindung mit einer Übertragungsrate von 1Gbps zwischen der uPathenterprisesoftware und dem

Bildmanagementsystem (IMS) empfohlen.

Tabelle1: Speziﬁkationen für einen Roche uPath Bildanalyse-Server für kleine Labors

Parameter Details

Prozessor CPU mit 3,6 GHz

Anzahl der Cores 4

RAM 6 x 8GB (48GB)

Hyper-Threading Deaktiviert

Festplatte 240 GB SSD

Betriebssystem Microsoft Windows Server 2016

Support für virtuelle Maschine (VM) Ja

Zusätzliche Hinweise zu VM Wegen des benötigten Overhead-Arbeitsspeichers für die VM sind die Leistungen nicht

mit den physischen Servern identisch.

Virusschutz Symantec Endpoint Protection Version 12

Leistung 110V/220V, 800Watt (2)

Anschlüsse 2 USB, HPE Eth 10/25Gb-Adapter

Unterbrechungsfreie Stromversorgung Empfohlen

Tabelle 2: Speziﬁkationen für Roche uPath Bildanalyse-Server für mittelgroße bis große Labors

Parameter Details

Prozessor CPU mit 3,6 GHz (2 Prozessoren)

Anzahl der Cores 8 pro Prozessor/16 insgesamt

RAM 12 x 8GB (96 GB)

Hyper-Threading Deaktiviert

Festplatte 240 GB SSD (2x)

Betriebssystem Microsoft Windows Server 2016

Support für virtuelle Maschine (VM) Ja

Zusätzliche Hinweise zu VM Wegen des benötigten Overhead-Arbeitsspeichers für die VM sind die Leistungen nicht

mit den physischen Servern identisch.

Virusschutz Symantec Endpoint Protection Version 12

Leistung 110V/220V, 800Watt (2)

Anschlüsse 2 USB, HPE Eth 10/25Gb-Adapter

Unterbrechungsfreie Stromversorgung Empfohlen

Schadsoftware und unbefugte Zugriffe können zu

Datenverlusten und Nichtverfügbarkeit des Geräts führen.

Um eine Infektion durch Schadsoftware, unbefugte Zugriffe und

Gerätemissbrauch zu vermeiden, sind folgende Empfehlungen

wesentlich:

• Installieren und führen Sie keine andere Software auf dem Gerät

aus.

• Stellen Sie sicher, dass andere Rechner und Dienste im

Netzwerk ordnungsgemäß gesichert und gegen Schadsoftware

und unbefugte Zugriffe geschützt sind. Dies betrifft zum

Beispiel das Laborinformationssystem (LIS) und Archivierungs-

und Backup-Laufwerke oder -Dienste.

• Die Kunden sind für die Sicherheit ihres lokalen

Netzwerks verantwortlich, vor allem beim Schutz gegen

Schadsoftware und Angriffe. Dieser Schutz kann auch

Maßnahmen wie eine Firewall beinhalten, um das Gerät von

unkontrollierten Netzwerken zu trennen, und Maßnahmen,

die sicherstellen, dass das angeschlossene Netzwerk frei von

Schadsoftwarecode ist.

• Beschränken Sie den physischen Zugriff auf das Gerät und

alle angeschlossenen IT-Infrastrukturen (Rechner, Kabel,

Netzwerkgeräte usw.).

• Stellen Sie sicher, dass die Geräte-Backup- und Archivdateien

vor unbefugten Zugriffen und Zerstörung geschützt sind.

Diese Liste umfasst auch den entfernten Speicherort, Disaster-

Recovery-Speicherorte und die sichere Übertragung von

Backup-Dateien.

• Verwenden Sie nach Möglichkeit eine Firewall, um den

Netzwerkverkehr zu beschränken.

• USB-Flash-Speichermedien eignen sich für verschiedene

Daten-Backups und -Wiederherstellungen. Ein unsachgemäßer

Umgang mit USB-Flash-Speichermedien kann zu

Datenverlusten oder Gerätestörungen führen.

• Verwenden Sie ausschließlich USB-Flash-Speichermedien, die

vom Roche Servicetechniker getestet und installiert wurden.

• Zu jedem Zeitpunkt kann nur ein USB-Speichermedium

gleichzeitig verwendet werden. Bevor Sie ein USB-Flash-

Speichermedium einstecken, sollten Sie daher prüfen, ob

bereits andere USB-Speichermedien angeschlossen sind.

• Vor dem Herausziehen eines USB-Flash-Speichermediums

wählen Sie in Windows die Schaltﬂäche „Auswerfen“.

Datensicherheit

• Die Betriebssystem(OS)-Standardkonﬁguration des Servers

bei der Lieferung darf nicht geändert werden, da dies

Auswirkungen auf die aus Sicherheitsgründen gehärtete OS-

Konﬁgurationen hätte.

• Um eine Virusinfektion der uPath enterprise software zu

vermeiden, verwenden Sie das USB-Flash-Speichermedium

nur bei diesem Gerät. Speichern Sie keine anderen Daten auf

diesem USB-Flash-Speichermedium.

8 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Arbeitsablauf bei der Verwendung des uPathHER2(4B5) Algorithmus

Im Lieferumfang enthaltene Materialien

• uPathHER2(4B5) Algorithmus

Nicht im Lieferumfang enthaltene, erforderliche Materialien

• uPath enterprise software

• Objektträger mit Brustgewebeschnitten, gefärbt mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper und ultraView Universal DAB

Detection Kit in einem BenchMark ULTRAGerät.

• VENTANA DP 200 Objektträger-Scanner

Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen

1. Zur Verwendung in der In-vitro-Diagnostik (IVD).

2. Nur zur professionellen Verwendung.

3. WICHTIGER HINWEIS: In den USA ist der Verkauf dieses Produkts laut Bundesgesetz nur durch einen Arzt oder auf Anordnung eines

Arztes zulässig. (Rx Only (verschreibungspﬂichtig))

4. Bei Verdacht auf ein schwerwiegendes Ereignis im Zusammenhang mit diesem Produkt wenden Sie sich an den Roche-Vertreter vor

Ort und melden das Ereignis bei der zuständigen Behörde des EU-Mitgliedstaats bzw. des Landes, in dem sich der Benutzer beﬁndet.

Arbeitsablauf

1. Das Brustgewebe auf einem Objektträger wird mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper in einem BenchMark

ULTRAGerät gefärbt.

2. Die Bilderfassung (Gesamtobjektträger-Scan) erfolgt mit einem VENTANA DP 200 Objektträger-Scanner bei 20-facher

Vergrößerung in einer z-Ebene.

3. Die erfassten digitalen Bilder werden von dem Computer, der mit dem VENTANA DP 200 Objektträger-Scanner verbunden ist, zum

Bildverwaltungssystem (IMS) auf einen zentralen Server übertragen.

4. Nach dem Transfer zum Server legt die uPath enterprise software einen Fall an. Die Fallerstellung kann automatisch und

durch Kommunikation mit dem Laborinformationssystem (LIS) erfolgen: Dabei werden die ID-Daten (z.B. Gewebetyp und

primärer Antikörper) auf dem Barcode-Etikett des Objektträgers verwendet. Alternativ werden die Daten manuell in die

uPathenterprisesoftware eingegeben. Weiterführende Hinweise sind im Benutzerhandbuch der uPathenterprisesoftware

(PN1018943DE) zu ﬁnden.

5. Wenn der uPathHER2(4B5) Algorithmus installiert ist (muss auf einem anderen Server als die uPathenterprisesoftware und das

IMS installiert sein) und ein 20-fach vergrößertes Bild mit dem passenden Färbe- und Gewebetyp geladen wird, veranlasst die

uPathenterprisesoftware automatisch eine Analyse des gesamten Objektträgers (WSA, Whole Slide Analysis).

6. Im Rahmen der WSA wird das gescannte Gesamtbild automatisch analysiert.

7. Nach Abschluss der WSA erhält der Pathologe in der uPathenterprisesoftware folgende Meldung in einem blauen Feld: „analysis

successful“ (Analyse erfolgreich).

8. Mithilfe der Werkzeuge ROI und Exclusion (Ausschluss) der uPathenterprisesoftware kann der Pathologe speziﬁsche ROIs für die

Bewertung auswählen.

9. Der Pathologe prüft die Bildanalyseergebnisse und akzeptiert oder überschreibt daraufhin den Score.

9 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Färbung

• Die Vorbereitung und Färbung der Gewebe sollten gemäß den Empfehlungen im Methodenblatt für den VENTANAanti-HER2/

neu(4B5) Antikörper erfolgen.

• Alle ordnungsgemäßen Kontrollen sind zu prüfen. Entspricht die Färbung nicht den Empfehlungen im Methodenblatt für den

VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper, muss sie wiederholt werden.

• Vor jeder Analyse mit dem uPathHER2(4B5) Algorithmus muss das Gewebe mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper

und unter Verwendung aller im Methodenblatt des VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörpers aufgeführten Materialien und

Zubehörartikel gefärbt werden.

• Der VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper erlaubt den Nachweis von HER2-Protein in FFPE-Brustgeweben nach Färbung mit

ultraView Universal DAB Detection Kit in einem BenchMark ULTRAGerät.

Bilderfassung

Für das Scannen der Objektträger ist ein VENTANA DP 200 Objektträger-Scanner erforderlich. Die Bilder werden mit 20-facher

Vergrößerung aufgenommen. Das Gewebe sollte keine Falten aufweisen und nicht von Tinte überdeckt sein. Wenn größere

Abschnitte des Bildes nicht scharf sind, wird empfohlen, den Objektträger ein zweites Mal zu scannen. Weiterführende Hinweise zum

Scannen ﬁnden Sie im Benutzerhandbuch des VENTANA DP 200 Objektträger-Scanners IVD (PN1017149DE).

Allgemeine Navigation: uPathenterprisesoftware

Die uPathenterprisesoftware erlaubt eine Anpassung an die Anforderungen einzelner Personen und Standorte, was insbesondere

die Berichtkonﬁguration und die Benutzeroberﬂäche betrifft. Dieses Algorithmus-Handbuch konzentriert sich ausschließlich auf

die Werkzeuge, die für den uPathHER2(4B5) Algorithmus benötigt werden. Weiterführende Hinweise zur uPathenterprisesoftware

ﬁnden Sie im Benutzerhandbuch für die uPathenterprisesoftware.

10 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Arbeitsablauf für Pathologen

Öffnen eines Falls in der uPath Enterprise Software

Bilder von Brustgewebe, das mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper gefärbt wurde, können durch Doppelklicken auf

einen Fall oder durch Auswählen eines Falls und Drücken der Registerkarte Viewer (Anzeige) geöffnet werden (Abb.1).

Es wird ein Bildschirm mit allen Bildern angezeigt, die einem Fall zugewiesen sind (Abb.2).

Abb.2

Abb.1

11 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Nach der Färbung mit dem VENTANAanti-HER2/neu(4B5) Antikörper wird der Objektträger vom VENTANA DP 200 Objektträger-

Scanner mit 20-facher Vergrößerung eingescannt. Das Bild wird von der uPathenterprisesoftware importiert und einem Fall

zugewiesen. Der uPathHER2(4B5) Algorithmus löst automatisch eine WSA aus. Wie viel Zeit die WSA-Vorberechnungen in Anspruch

nehmen, hängt von den Serverspeziﬁkationen, der Bildgröße und der Anzahl der Bilder in der Warteschlange ab. Die Meldung „waiting

to start auto-analysis” (Wartet auf Start der automatischen Analyse) bedeutet, dass sich die Bilder in der Warteschlange beﬁnden, aber

noch nicht analysiert wurden; „analyzing” (Analyse läuft) bedeutet, dass gerade eine WSA durchgeführt wird (Abb.3 und 4).

Nach Abschluss der Bild-WSA durch die uPathenterprisesoftware wird im Viewer (Anzeige) die Meldung „analysis successful“

(Analyse erfolgreich) unter dem Objektträgerbild angezeigt (Abb.5). Die Bewertung kann erst nach erfolgreichem Abschluss einer

WSA durchgeführt werden.

Abb.5

Abb.4

Abb.3

12 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Gesamttumor-ROI(s) kennzeichnen: Tumorbereich auswählen

Wählen Sie im ROI-Dropdown-Menü (Abb.6) die Schaltﬂäche Freehand (Freihandwerkzeug) aus und wählen Sie mit diesem

Werkzeug auf dem IHC-Objektträgerbild den Tumorbereich/die Tumorbereiche aus, der/die analysiert werden soll/en. In Abb.7 ist

ein Bild dargestellt, bei dem eine einzelne ROI gekennzeichnet wurde. Es können zusätzliche ROIs gekennzeichnet werden. Jeder

ausgewählte Bereich führt dazu, dass im Slide Panel (Objektträgerbereich) eine ROI angezeigt wird (Abb.8).

Abb.7

Abb.8

Abb.6

13 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Gesamttumor-ROI(s) kennzeichnen: Ausschlussbereich

Beim Kennzeichnen von ROIs kann es notwendig sein, bestimmte Bereiche auszuschließen. Bereiche, die besser vermieden bzw.

ausgelassen werden, und Beispiele für solche Bereiche werden im Abschnitt „Färbungsmerkmale“ beschrieben. Im Dropdown-Menü

Exclusion (Ausschluss) (Abb. 9) wählen Sie Freehand (Freihandwerkzeug), um bestimmte Bereiche auszuschließen (Abb.10). Sind

große Bildbereiche verschwommen bzw. nicht scharf, scannen Sie den Objektträger ein zweites Mal.

Ausgeschlossene Bereiche werden vom uPathHER2(4B5) Algorithmus nicht berücksichtigt. Gefärbte und ungefärbte Tumorzellen

in diesem Bereich werden von der Gesamtanalyse ausgeschlossen. Wird ein Ausschlussbereich in einer ROI deﬁniert, die bereits

analysiert worden ist, muss die ROI erneut analysiert werden. Die Überlappung und der Score werden entsprechend aktualisiert.

Die Kennzeichnung einer großen Anzahl von Ausschlussregionen, insbesondere komplizierter Ausschlüsse mit Freehand

(Freihandwerkzeug), kann zeitaufwändig sein und die Efﬁzienz des Arbeitsablaufs beeinträchtigen, wirkt sich aber nur geringfügig

auf das Endergebnis aus. Wenn ein Fall eine hohe Anzahl von Ausschlüssen erfordert, wird folgende Vorgehensweise empfohlen:

• Kennzeichnen Sie mehrere ROIs und schließen Sie unter minimalem Einsatz des Werkzeugs Exclusion (Ausschluss) Teile des Gewebes

aus, die Sie als nicht auswertbar erachten.

• Begrenzen Sie die Zahl der Ausschlüsse und überschreiben Sie den Score mit einem anderen Score.

Gesamttumor-ROI(s) kennzeichnen: Löschen

Ist die ausgewählte Gesamttumor-ROI nicht optimal, kann sie gelöscht werden. Klicken Sie auf die Mitte der Gesamttumor-ROI auf dem

Bild, um sie auszuwählen. Klicken Sie dann im Slide Panel (Objektträgerbereich) auf die Schaltﬂäche Delete (Löschen) (Abb. 11) oder

auf das Abfalleimersymbol im Objektträgerbild neben der ROI (Abb. 12). Es wird ein Bestätigungsfenster angezeigt. Wählen Sie Conﬁrm

(Bestätigen), um die Löschung der ausgewählten ROI zu bestätigen. Wählen Sie Cancel (Abbrechen), um die ROI beizubehalten.

Abb.9

Abb.11

Abb.12

Abb.10

14 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

Nach dem Kennzeichnen aller Gesamttumor-ROIs und/oder Ausschlussbereiche kann das Bild analysiert werden. Klicken Sie auf die

Mitte der Gesamttumor-ROI, um sie auszuwählen oder klicken Sie im Slide Panel (Objektträgerbereich) auf die Schaltﬂäche ROI. Bei

jeder ROI klicken Sie entweder auf die Schaltﬂäche Image Analysis (Bildanalyse) im Slide Panel (Objektträgerbereich, Abb.13) oder

auf das Analysesymbol neben der ROI (Abb.14).

Nach Abschluss der HER2-Analyse wird das Ergebnis an zwei Stellen im Slide Panel (Objektträgerbereich) angezeigt: unter Slide

Score (Objektträger-Score) und neben den ROIs (Abb.15). Der Slide Score (Objektträgerbewertung) ist die Summe aller HER2-Status

aller ausgewählten ROIs. Dies ist der Score, der im Bericht erscheint.

In den Ausklappbereichen Slide Score (Objektträger-Score) und ROI Details (ROI-Details) ﬁnden Sie weiterführende Informationen.

Diese Bereiche werden durch Klicken auf das jeweilige Ausklappsymbol (Abb.16) angezeigt. Der Ausklappbereich Slide Score

(Objektträgerbewertung) wird angezeigt (Abb.17). Wenn Sie erneut auf das gleiche Ausklappsymbol klicken, werden diese

Informationen wieder ausgeblendet.

Abb.15

Abb.17

Abb.16

Abb.13

Abb.14

15 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

HER2-Bildanalyse: Farb-Overlay

Nach Klicken auf die Schaltﬂäche ROI(s) Analysis (ROI-Analyse) und dem Abschluss der Gewebeanalyse wird auf der ROI ein

Farb-Overlay angezeigt. In dem Bild in Abbildung18 repräsentiert die rote Overlay-Farbe die Zellmembranen mit positiver HER2-

Färbung. Wird das Bild bewegt (durch Drücken der linken Maustaste und Ziehen des Bilds), verschwindet das Overlay (Abb.19). Nach

Loslassen der Maustaste wird das Overlay wieder eingeblendet (Abb.18).

Abb.18

Abb.19

16 Handbuch zur Anwendung des uPath HER2 (4B5) Bildanalyse-Algorithmus für Brustgewebe

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Roche uPath IVD Benutzerhandbuch

Marke: Roche

Modell: uPath IVD

Typ: Benutzerhandbuch

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Roche uPath IVD Benutzerhandbuch

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