3B SCIENTIFIC 1012852 [W19925] Bedienungsanleitung

Marke: 3B SCIENTIFIC

Modell: 1012852 [W19925]

Kategorie: Montagesätze

Typ: Bedienungsanleitung

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Lieferumfang

DasModell„Mini“wirdinfolgenderAusstattunggeliefert:

• ElektrophoresekammermitkorrosionsgeschütztenPlatinelektrodenundhochwertigenAnschlüssenfürden

 Plus-undMinuspol.

• SicherheitsdeckelmitverschraubtenKabeln.

• ZweiGelkämme,1,5mmdick,je12Zähne.

• Bedienungsanleitung.

Sicherheitshinweise

• VorInbetriebnahmedieBedienungsanleitungbittesorgfältigdurchlesen.

• ZurStromversorgungausschließlichCE-konformeGleichstrom-Netzgeräteverwenden.

• VordemAbhebendesSicherheitsdeckelsistdieElektrophoresekammerunbedingtvomNetzgerätzutrennen.

• DenDeckelnieaufnassenOberflächenablegen.

• BeiNichtgebrauchderElektrophoresekammerdieseimmervomNetzgerättrennen.

• DiefürdieKammervorgesehenemax.StromstärkeundSpannungnichtüberschreiten(150mA,120V).

• Diemax.FüllhöhedesElektrophoresepuffersbeachten.

Technische Merkmale

BeiderElektrophoresekammer„Mini“handeltessichumeinModell,beidemdasGeldirektinderKammergegossenwird;

undzwarindenRaum,derdurchdieweißenKunststoffstäbeaufdemKammerbodeneingefasstist.

DieGelkammerverfügtübereinenUV-durchlässigenBoden,sokannderVerlaufderElektrophoresedurchBestrahlungmittels

UV-Lichtvonuntenleichtverfolgtwerden,sofernfluoreszierendeFarbstoffebereitswährenddesGellaufseingesetztwerden.

DasGelkannselbstverständlichauchherausgenommenwerden,umdieDokumentationdurchzuführenbzw.umAnfärbungen

nachdemLaufdurchzuführen.

Bitte verwenden Sie bei allen o.g. Handhabungen nur UV-Licht mit einer Wellenlänge oberhalb von 300 nm.

HartesUV-Licht(<300nmWellenlänge)schädigtsowohldieGelkammeralsauchdieNukleinsäuren.

WennSienurkurzeTrennstreckenbenötigen,sokönnenSiebeideKammpositionennutzen.DannstehenIhnendoppeltso

vieleProbentaschenzurVerfügung.

Garantie

DerHerstellergarantiert, dassdie Elektrophoresekammer vorder Auslieferunggenaugeprüft wurdeundden geltenden

Sicherheitsstandardsentspricht.

BitteüberprüfenSiedieLieferungsofortnachErhaltaufVollständigkeitundevtl.Transportschäden.SolltedieLieferungfeh-

lerhaftoderbeschädigtsein,wendenSiesichumgehendan3BScientific.

Auf die Elektrophoresekammer gewährt der Hersteller 24 Monate Garantie, sofern dieKammer gemäß der Bedienungsan-

leitungeingesetzt wurde.AnsprücheaufkostenlosenErsatz oderReparatur bestehennicht, fallseinefalsche Handhabung

vorliegt.Eine Haftungfür Folgeschäden,dieauseinergrob fahrlässigenoder vorsätzlichfalschen Verwendungder Elek-

trophoresekammerentstehen,wirdhiermitausgeschlossen.

DieHaftungdesHerstellersfürVorsatzundgrobeFahrlässigkeit,sowiefürSchädenausderVerletzungdesLebens,desKörpers

oderderGesundheitbleibthiervonunberührt.

Diezwei Platinelektrodenhalten beisachgerechter Behandlungerfahrungsgemäßviele Jahre.Schäden tretenmeistens

durchmechanischeZerstörung(Spülbürsteo.ä.)aufoderdurchdenKontaktmitsog.„Platingiften“wiePhosphor,Boroder

Schwermetallen(Blei,Zinketc.)auf.DahersinddiePlatinelektrodenvonderGarantieausgenommen.

UmWeiterentwicklungenzeitnaheinführenzukönnen,behältsichderHerstellervor,technischeundkleineoptischeDetails

ohneVorankündigungändernzudürfen.

Allgemeine Bedienungshinweise

Gießen von Agarosegelen

1. BitteSchutzkleidunganziehen,SchutzbrilleaufsetzenundHandschuhefürdasErhitzenderAgarosegellösungbereitlegen.

2. EntfernenSiedenSicherheitsdeckelderElektrophoresekammervorsichtig.

Elektrophoresekammer „Mini“

Deutsch

3. FürdasAnsetzender GellösungdürfennurgeeigneteAgarosenundentsprechendeElektrophoresepuffereingesetztwer-

den.FürdieHerstellungderAgarosegellösungwirdeineentsprechendeMengeAgaroseineinemkleinenErlenmeyerkolben

abgewogen, einegeeignete MengeElektrophoresepufferdazugegossenund einRührfisch (Erhitzenmit Heizrührer)hin-

zugegeben. DasGewichtdes befülltenErlenmeyerkolbenswird festgehalten,so dassauftretendeKochverlustedurch

VerdampfendurchZugabevondestilliertemH2Oausgeglichenwerdenkönnen.SohatdieGellösungtatsächlichdievor-

geseheneAgarosekonzentration.ZumLösender AgarosewirdderErlenmeyerkolbenentwederindieMikrowellegestellt

oderderErlenmeyerkolbenaufeinerHeizplatteunterRührenundbeimittlererHeizleistungerhitzt.DieErhitzunginder

Mikrowellesollte kurzbei mittlererHitzeerfolgen undmehrfach wiederholtwerden. Zwischendurchnimmtman den

Erlenmeyerkolbenheraus(Achtung:Handschuhe,Schutzbrilletragenundggf.aufSiedeverzugachten!)undschwenktvor-

sichtigdieGellösungkreisförmig.DannerneutindieMikrowellegebenunddengesamtenVorgang3-4Malwiederholen

bisdieAgarosevollständiggelöstist.

4. VordemGießendesGelsdieGellösungauf60°Cabkühlen.DieGellösungwirddannluftblasenfreiindieAussparungzwi-

schendie beidenweißenKunststoffstreifendes Kammerbodensgegossen(Fassungsvermögen beträgtca. 40ml). Dann

denKamm(oder2Kämme)einsetzen.Daraufachten,dasssichkeineLuftblasenandenTaschenrändernbilden.Geleaus

StandardagarosesindbeiRaumtemperaturinca.20Minutenverfestigt.

5. NachVerfestigungdesAgarosegelsmitElektrophoresepufferca.3mmüberschichten,damitdasGelnichtaustrocknet.Das

GelkannnunnachvorsichtigemEntfernendesKammssofortbeladenwerden.DasüberschichteteGelkannauchfürein

paarTageaufbewahrt werden,amgünstigsten sogarmiteingesetztemKamm. DasGel musslediglich vorAustrocknung

geschütztwerden(AbdeckenmitHaushaltsfolie).

Beladung von Agarosegelen und Elektrophorese

1. SobalddasAgarosegelvollständigtverfestigtist,wirddasGelmitElektrophoresepufferüberschichtetbisdiemax.Füllhöhe

desPuffer(„FillLine“)erreichtist.

2. EntfernenSiedenKamm(Kämme)vorsichtigausdemAgarosegel,indemSiediesevorsichtigwippendhin-undherbewe-

genunddanngeradenachobenherausziehen.

3. NunkönnendieTaschendesGelsmitdenvorbereitetenProbenbeladenwerden.DieProbenmüssenvorabmiteinem

entsprechendenGelladepufferversetztwerden,derdasspezifischeGewichtderProbenerhöhtundsomitdieProbenbeim

AuftragenmitderMikropipetteindieTaschenabsinkenlässt(vgl.AbschnittGelladepuffer).

4. BeimBeladenderGeltaschendieSpitzederMikropipettevorsichtigleichtindieTaschetauchenunddieProbelangsam

herausdrücken.DabeibittenichtdenTaschenbodenbeschädigen.

 DieserVorgangsolltevonAnfängernmit„Übungsproben“,dienurausH2OundGelladepufferbestehen,eingeübtwerden.

5. AufjedemGelsolltemindestenseinLängenstandardmitaufgetragenwerden,damiteineGrößenbestimmungderaufge-

trenntenDNA-Fragmenteerfolgenkann.

6. Setzen Sienun denSicherheitsdeckelauf dieElektrophoresekammer undschließen Siedie Kammeran eingeeignetes

Netzgerätan.

 BittebeachtenSiedierichtigePolung.NukleinsäurensindimalkalischenbisneutralenMilieunegativgeladenundwan-

dernzurAnode(rotePol).

7. SchaltenSiedieSpannungsquelleeinundführenSiedieElektrophoresebeieinerangemessenenSpannungdurch(80-120

V).DerVerlaufderElektrophoresekannanhandderWanderungdesFarbstoffs,dersichimGelladepufferbefindet,verfolgt

werden.

 Häufigwerden Bromphenolblaubzw. Xylencyanolals Farbstoffeim Gelladepuffer eingesetzt. DasLaufverhalten

bzw. diesog. Comigrationzu doppelsträngigen DNA-FragmentenistvomAgarosetyp,von der Gelstärkeund vom

Elektrophoresepufferabhängig.

 Zur Groborientierung:Bromphenolblau läuftin1xTAE-Elektrophoresepuffer undStandardagarosegelvon1%in etwa

wieeinDNA-Fragmentmit650Basenpaaren.UntergleichenBedingungenläuftXylencyanolwieeinFragment mit5000

Basenpaaren.

Anfärbung von Nukleinsäuren

Daes verschiedene Möglichkeitender Anfärbung vonNukleinsäurengibt, wirdan dieser Stelleauf dieeinschlägige

Fachliteraturverwiesen(Sambrocket.al.,1989).

Auswertung / Dokumentation

GrößenbestimmungenvonNukleinsäure-Fragmentenkönnendurch Vergleichmit denFragmenten einesLängenstandards

durchgeführtwerden.Einegenaue Beschreibungdes Verfahrensfindetman z.B.im Fachbuch„MolekulareGenetik“von R.

Knippers(2006).

Reinigung und Pflege

Achtung:DieElektrophoresekammervorderReinigungvomNetzgerättrennen.

DieElektrophoresekammerundKämmesolltennachjederVerwendungmitlauwarmemWassergereinigtwerden.Fallsnötig,

kann zusätzlichetwas Spülmittelverwendet werden.Bitte verwenden SiekeineSpülbürstenoder ähnliches, dadamit die

Platinelektrodenbeschädigtwerdenkönnen. EinAbspülen derElektrophoresekammernach derReinigung mitentkalktem

oderdestilliertemWasserverhindertdasEntstehenvonKalkflecken.

BittedieElektrophoresekammerniestundenlangodergarüberNachtungereinigtstehenlassen,dasichSchmutzränderbil-

denkönnendurchangetrockneteGelresteoderPuffer,diesichdannnurschwerodergarnichtmehrvollständigentfernen

lassen.

Achtung:Die elektrischenAnschlüsse bittemöglichst vomWasserfernhalten.Solltendiesedennoch einmaletwas Wasser

abbekommenhaben,bittemiteinemweichenKüchentuch/Geschirrtuchsorgsamtrockenputzenbzw.anderLufttrocknen

lassen.BittehierfürkeinPapierverwenden,dadieshäufigzugrobistundkleineKratzerverursacht.Bitteauchnichttrocken

fönen,dieheißeFönluftkannzuSchädenanAnschlüssen,VerschraubungenunddemAcrylmaterialführen.

Achtung:Zur Reinigungweder Ethanolnochsonstige organische Lösungsmittelverwenden.Es könnenRisse,Sprünge oder

andereunerwünschteMaterialveränderungen(Blindwerdenetc.)auftreten.

Benötigte Materialien und Rezepte

Elektrophoresepuffer

Der Elektrophoresepuffer stellt die fürdie Elektrophorese benötigenIonen bereit undsorgt für einen konstanten pH-Wert,

damitdie Nukleinsäurendie gewünschte Nettoladungaufweisen. Nukleinsäurensind imalkalischen bisneutralen Milieu

negativgeladen.InderRegelbeinhaltenElektrophoresepufferauchKomponenten,diedieNukleinsäurenvorDegradierung

schützen,z.B.EDTA,welcheszweiwertigeKationenkomplexiertunddadurchDNaseninhibiert.

An dieser Stelle wirdder gängige Elektrophoresepuffer TAE für Elektrophorese von DNAunter nicht-denaturierenden

Bedingungenbeschrieben.TAEstehtfürTris-Acetat-EDTA.

DenPufferkönnenSieentwederselbstherstellenoderaberz.B.bei3BScientificalsFertig-Pufferkonzentratbeziehen.

Agarose, Gelvolumen und Gelkonzentrationen

ObgleichverschiedeneAgarosenangebotenwerden,hatdiesog.Standard-AgarosesicherlichdiegrößteBedeutung.Fürdas

GießeneinesAgarosegelsindervorliegendenKammerwirdca.40mlGellösungbenötigt.BitteetwasmehrGellösungherstel-

len,daimmereinRestimAnsatzgefäßverbleibt.

JenachAgarosegehaltdesGelswerdenMoleküleunterschiedlicherGrößenbereicheoptimalaufgetrennt,dieinderuntenste-

hendenTabelleaufgeführtsind.

Optimale Auftrennungsbereiche doppelsträngiger DNA bei verschiedenen Agarosegehalten

(Standardagarose)

Agarosegehalt (%) Agarose (g) Puffer (ml) Optimaler Trennbereich (kbp)

 0,5 0,25 50 1–15

 0,7 0,35 50 0,8–10

 1,0 0,5 50 0,5–7

 1,2 0,6 50 0,3–6

 1,5 0,75 50 0,2–4

 2,0 1,0 50 0,1–3

Gelladepuffer

Diezu analysierendenProbenwerden vordem Auftragenauf dasGel miteinem geeignetenGelladepuffer vermischt.

GelladepufferenthaltenFarbstoffezurSichtbarmachungdesTrennvorganssowieGlycerin,Saccharoseo.ä.,damitdieProben

schwereralsderElektrophoresepufferwerdenundbeiderProbenauftragungleichtindieGeltaschensinken.Häufigwerden

Bromphenolblaubzw.XylencyanolalsFarbstoffeimGelladepuffereingesetzt.DasLaufverhaltenbzw.diesog.Comigrationzu

doppelsträngigenDNA-FragmentenistvomAgarosetyp,vonderGelstärkeundvomElektrophoresepufferabhängig.

ZurGroborientierung:Bromphenolblauläuftin1xTAE-Puffer(vgl.Elektrophoresepuffer)undStandard-Agarosegelvon1%in

etwawieeinDNA-Fragmentmit650Basenpaaren.UntergleichenBedingungenläuftXylencyanolwieeinFragmentmit5000

Basenpaaren.

Deutsch

DNA-Längenstandard

EinDNA-LängenstandardwirdaufjedemGelmindestensineineSpuraufgetragen,umeineGrößenbestimmungderProben

vernehmenzukönnen.DNA-LängenmarkerbestehenausDNA-FragmentenbekannterGröße.

Anfärbung von Nukleinsäuren

Daes verschiedene Möglichkeitender Anfärbung vonNukleinsäurengibt, wirdan dieser Stelleauf dieeinschlägige

Fachliteraturverwiesen(Sambrocket.al.,1989).

Konformitätserklärung

DieElektrophoresekammer „Mini“entspricht dengrundlegendenSicherheitsanforderungengemäß EN:50081-1 (1992)und

EN:50082-1(1992).

Literatur

Ausubel,FrederikM.etal.(Ed.),(2005).ShortProtocolsinMolecularBiology,

ACompendiumofMethodsfromCurrentProtocolsinMolecularBiology.Wiley-VCH,Hoboken.

Knippers,R.(2008).MolekulareGenetik.ThiemeVerlag,Stuttgart.

SambrookJ,Fritsch E.F. ManiatisT.(1989). MolecularCloning: ALaboratory Manual.Cold SpringHarbor Laboratory Press,

NewYork.

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3B SCIENTIFIC 1012852 [W19925] Bedienungsanleitung

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